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liushang1990

木虫 (小有名气)

[交流] western blot结果求解释

western结果求解释，本人用Abzoom品牌E2F1的试用装抗体（实验室仅此一支），是兔多抗。下面一排条带是beta actin。上面一排条带分子量比130KD大一点。但是E2F1分子量是70KD，在那附近却没有带。有人说有些抗体在130KD附近有杂带，但是为什么上样量差不多，杂带却不一样呢？（三条泳道，第一条上的是NC组，第二和第三上的是转染了不同量的质粒。）以前用其他的蛋白样，同样的抗体，130KD附近的条带差不多大。如果有比较满意的结果，追加小红花，谢谢！
western blot结果求解释
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1楼 2013-08-11 18:40:41
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liushang1990

木虫 (小有名气)
如果是一种蛋白，那么分子量130KD的蛋白可能是那些呢？
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2楼2013-08-11 18:43:39
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沧__海

版主 (文学泰斗)
引用回帖:
14楼: Originally posted by liushang1990 at 2013-08-11 20:20:13

呵呵

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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23楼2013-08-11 20:25:18
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jiang701820

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
liushang1990(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-08-13 17:18:00
这个太正常不过了，首先，你这个抗体是多克隆抗体，存在杂带太正常了。尽管楼主说上样量一致，但杂带却亮度不一，这个属于正常情况，只能说这个杂带在你的样品中表达丰度不一样。另外楼主说以前用其他蛋白样品的时候这个杂带差不多大，这个只能说不同的样品中该杂带蛋白表达的量本来就各不相同，如果楼主做WB比较多的话，应该会发现很多这样的情况，尤其是你不裁胶或膜的时候这种情况就更多了，就楼主用的这个抗体可能在其他位置还有杂带，而且亮度可能跟这个杂带完全不一样
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25楼2013-08-12 00:18:20
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
liushang1990(金币+1): 谢谢参与
确定是否是杂带的方法最直接的就是做正对照和负对照。正对照一般用该蛋白的纯品，负对照一般是该基因突变株的样品。
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26楼2013-08-12 10:47:11
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liushang1990

木虫 (小有名气)
引用回帖:
25楼: Originally posted by jiang701820 at 2013-08-12 00:18:20
这个太正常不过了，首先，你这个抗体是多克隆抗体，存在杂带太正常了。尽管楼主说上样量一致，但杂带却亮度不一，这个属于正常情况，只能说这个杂带在你的样品中表达丰度不一样。另外楼主说以前用其他蛋白样品的时候 ...

谢谢！呃，这个抗体就那里有条带，其它地方很干净，好几次都这样。所谓样品问题，我用的都是H23细胞的裂解液跑的，所以感觉也不像。
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27楼2013-08-13 16:44:45
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liushang1990

木虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-12 10:47:11
确定是否是杂带的方法最直接的就是做正对照和负对照。正对照一般用该蛋白的纯品，负对照一般是该基因突变株的样品。

谢谢！不过我不是很清楚，能说详细点不？
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28楼2013-08-13 16:59:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
27楼: Originally posted by liushang1990 at 2013-08-13 16:44:45
谢谢！呃，这个抗体就那里有条带，其它地方很干净，好几次都这样。所谓样品问题，我用的都是H23细胞的裂解液跑的，所以感觉也不像。...

如果你有目标蛋白基因缺失的突变株，可以与样品同时跑，如果突变株里也有这条带，肯定是杂带。同理，用纯化的目标蛋白作为阳性对照，如果这条带不出现在阳性对照里面的话就是杂带了。
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29楼2013-08-13 20:37:41
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jiang701820

银虫 (小有名气)
引用回帖:
27楼: Originally posted by liushang1990 at 2013-08-13 16:44:45
谢谢！呃，这个抗体就那里有条带，其它地方很干净，好几次都这样。所谓样品问题，我用的都是H23细胞的裂解液跑的，所以感觉也不像。...

一般这种情况我都采取增加上样量和抗体浓度，如果还不出条带我就换抗体了，呵呵
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31楼2013-08-13 23:33:13
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zugur

新虫 (初入文坛)
★
liushang1990(金币+1): 谢谢参与
western blot 中经常出现目标蛋白shift一点的情况，但你的图片中，那个明显不是目标蛋白，是杂带。一抗很重要，你的一抗不行，需要重新尝试别的公司的一抗。

有人说有些抗体在130KD附近有杂带，但是为什么上样量差不多，杂带却不一样呢？没听过有这个说法，而且杂带并不是内参，不能用来作为上样量的参考。你不是有内参吗？
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32楼2013-08-14 04:10:41
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buzhaohu3楼
2013-08-11 18:49   回复  
liushang1990(金币+1): 谢谢参与
h
沧__海4楼
2013-08-11 18:57   回复  
liushang1990(金币+1): 谢谢参与
， [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
xiejf5楼
2013-08-11 18:58   回复  
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haixiawu6楼
2013-08-11 19:00   回复  
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westplator7楼
2013-08-11 19:04   回复  
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flyxu8楼
2013-08-11 19:05   回复  
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qj9210129楼
2013-08-11 19:34   回复  
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天涯201210楼
2013-08-11 19:55   回复  
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miaojiabing11楼
2013-08-11 20:01   回复  
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xianzhi201012楼
2013-08-11 20:04   回复  
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liushang199013楼
2013-08-11 20:20   回复  
引用回帖:
3楼: Originally posted by buzhaohu at 2013-08-11 18:49:33 h

liushang199014楼
2013-08-11 20:20   回复  
引用回帖:
4楼: Originally posted by 沧__海 at 2013-08-11 18:57:38 ，

liushang199015楼
2013-08-11 20:20   回复  
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiejf at 2013-08-11 18:58:30

liushang199016楼
2013-08-11 20:20   回复  
引用回帖:
6楼: Originally posted by haixiawu at 2013-08-11 19:00:45

liushang199017楼
2013-08-11 20:20   回复  
引用回帖:
7楼: Originally posted by westplator at 2013-08-11 19:04:14 1

liushang199018楼
2013-08-11 20:20   回复  
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8楼: Originally posted by flyxu at 2013-08-11 19:05:59

liushang199019楼
2013-08-11 20:21   回复  
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9楼: Originally posted by qj921012 at 2013-08-11 19:34:38

liushang199020楼
2013-08-11 20:21   回复  
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10楼: Originally posted by 天涯2012 at 2013-08-11 19:55:22

liushang199021楼
2013-08-11 20:21   回复  
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11楼: Originally posted by miaojiabing at 2013-08-11 20:01:45

liushang199022楼
2013-08-11 20:21   回复  
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12楼: Originally posted by xianzhi2010 at 2013-08-11 20:04:43

chenyh71824楼
2013-08-11 23:49   回复  
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yingying158830楼
2013-08-13 21:25   回复  
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