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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot 信号衰减的好快，求哪位有经验的分析下原因。。。。。。。
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PvPAP

金虫 (小有名气)

[求助] western blot 信号衰减的好快，求哪位有经验的分析下原因。。。。。。。

在暗房压片2min，再压一张5min的，后者的信号都不如前者的。靠两边的条带信号衰减的最明显，最边上的带还检测不出来。求破。。。。。
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1楼2013-03-17 10:01:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-17 20:09:45
PvPAP: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-03-17 22:29:08
用的是辣根过氧化物酶做底物的ECL吧。有一定衰减是正常的，因为产物本身不稳定性。不过，象你说的这么快，多半是试剂有些过期了。
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PvPAP
2楼2013-03-17 11:10:08
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gyesang

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【答案】应助回帖

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amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-17 20:09:51
PvPAP: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-03-17 22:29:13
也有一个原因就是，你的样品上样量太大，然后一抗二抗结合太强，这样加的DAB底物一下子就被分解了，所以信号就衰减了，如果衰减很快的话，大部分是这个原因
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PvPAP
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3楼2013-03-17 19:23:08
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PvPAP

金虫 (小有名气)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-17 11:10:08
用的是辣根过氧化物酶做底物的ECL吧。有一定衰减是正常的，因为产物本身不稳定性。不过，象你说的这么快，多半是试剂有些过期了。

是的。试剂可能是出了点问题，今天实验室有同学试着换一些新的，好像效果不错。谢谢回帖
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4楼2013-03-17 22:22:29
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PvPAP

金虫 (小有名气)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2013-03-17 19:23:08
也有一个原因就是，你的样品上样量太大，然后一抗二抗结合太强，这样加的DAB底物一下子就被分解了，所以信号就衰减了，如果衰减很快的话，大部分是这个原因

有可能。不过这个上样量之前也有试过，信号没有衰减的这么严重。其实我的蛋白量不大，不过由于样品要进行一些处理，导致上样体积太大，对于条带的形状倒是有些影响，正考虑减小一下反应体系。谢谢指教~
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5楼2013-03-17 22:28:24
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