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yuyang031985

金虫 (正式写手)

[求助] 请教Western blot问题 已有1人参与

最近在做Western blot,提取耐药细胞的p-gp蛋白,文献报道理论分子量170kd,我们跑出来的分子量130kd左右,而且还不确定是不是该条带,请高人指点哪里有可能出问题??

已使用过的抗体:Abcam的p-gp抗体(兔抗、鼠抗都用过);博士德的p-gp抗体
胶的浓度:6%、8%、10%和12%都使用过;
裂解液:碧云天的强、中强、弱的裂解液都试过;
提蛋白的方法:总蛋白和膜蛋白的提取都尝试过;
使用的膜:0.22微米的PVDF膜
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说说你不开心的事让我们开心一下哈!
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yuyang031985

金虫 (正式写手)

比较奇怪的是,我们参考文献里的方法,操作步骤什么的基本上都差不多,不同的地方有:
1)有用NC膜的,我们用的是0.22的PVDF膜;
2)抗体不一样,但也有文献用我们选的抗体做出来的;
说说你不开心的事让我们开心一下哈!
8楼2013-08-08 17:07:57
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hongyongbo

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
该蛋白是否有亚基,在提取纯化过程中降解导致少了40KD
2楼2013-08-07 21:08:26
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hongyongbo

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还要考虑下可变剪切
3楼2013-08-07 21:09:04
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biowandy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请问具体蛋白是什么名字?可以上uniprot研究下蛋白特性,
4楼2013-08-07 21:59:09
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