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T载体连接不上去
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fanwq258
木虫
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[交流]
T载体连接不上去
自己扩增的基因,连接T载体就是连不上,但是买载体时带的插入片段可以连接上,这可该怎么办呢?
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2013-08-05 09:53:35
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追梦草
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23楼
:
Originally posted by
随缘棒棒糖
at 2013-08-23 11:28:51
想请问您一下您的连接比例,我的目的片段3000-3500之间,连接做了一个月,没有结果。各种体系,比例,连接时间都尝试了,依然没成功。请不吝指教。...
我也是连了好几次才连上的。。。没有计算连接比例,我觉得尽量提高PCR产物回收的浓度和16度连接时间,连上的可能性会变大。还有转化最好做对照,保证感受态细胞,水浴锅的温度等都没问题,我们水浴锅的温度与我用温度计测的差3度…我感觉连长片段还要靠点运气,祝你好运。
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24楼
2013-08-24 11:37:51
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gyesang
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你是什么酶扩出来的片段,如果是高保真酶的话,你考虑加A尾了吗?
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2楼
2013-08-05 13:35:34
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fanwq258
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2楼
:
Originally posted by
gyesang
at 2013-08-05 13:35:34
你是什么酶扩出来的片段,如果是高保真酶的话,你考虑加A尾了吗?
不是高保真的酶,用的就是宝生物普通的ex taq
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3楼
2013-08-05 14:51:24
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考虑下连接条件、片段大小及各种成分的量
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4楼
2013-08-05 15:24:40
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