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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T载体连接不上去
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fanwq258

木虫 (正式写手)

[交流] T载体连接不上去

自己扩增的基因，连接T载体就是连不上，但是买载体时带的插入片段可以连接上，这可该怎么办呢？
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1楼 2013-08-05 09:53:35
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追梦草

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
23楼: Originally posted by 随缘棒棒糖 at 2013-08-23 11:28:51
想请问您一下您的连接比例，我的目的片段3000-3500之间，连接做了一个月，没有结果。各种体系，比例，连接时间都尝试了，依然没成功。请不吝指教。...

我也是连了好几次才连上的。。。没有计算连接比例，我觉得尽量提高PCR产物回收的浓度和16度连接时间，连上的可能性会变大。还有转化最好做对照，保证感受态细胞，水浴锅的温度等都没问题，我们水浴锅的温度与我用温度计测的差3度…我感觉连长片段还要靠点运气，祝你好运。
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24楼2013-08-24 11:37:51
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是什么酶扩出来的片段，如果是高保真酶的话，你考虑加A尾了吗？
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2楼2013-08-05 13:35:34
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-08-05 13:35:34
你是什么酶扩出来的片段，如果是高保真酶的话，你考虑加A尾了吗？

不是高保真的酶，用的就是宝生物普通的ex taq
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3楼2013-08-05 14:51:24
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hyphen007

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
考虑下连接条件、片段大小及各种成分的量
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4楼2013-08-05 15:24:40
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