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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T载体连接不上去
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fanwq258

木虫 (正式写手)

[交流] T载体连接不上去

自己扩增的基因，连接T载体就是连不上，但是买载体时带的插入片段可以连接上，这可该怎么办呢？
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1楼 2013-08-05 09:53:35
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随缘棒棒糖

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 追梦草 at 2013-08-05 23:02:13
浓度再提高些，16度再多连会，会更有可能连上。我前一阵刚连上3900bp的片段，PCR产物胶回收柱浓度为400ng/ul，16度连了14h.

想请问您一下您的连接比例，我的目的片段3000-3500之间，连接做了一个月，没有结果。各种体系，比例，连接时间都尝试了，依然没成功。请不吝指教。
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23楼2013-08-23 11:28:51
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你是什么酶扩出来的片段，如果是高保真酶的话，你考虑加A尾了吗？
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2楼2013-08-05 13:35:34
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fanwq258

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-08-05 13:35:34
你是什么酶扩出来的片段，如果是高保真酶的话，你考虑加A尾了吗？

不是高保真的酶，用的就是宝生物普通的ex taq
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3楼2013-08-05 14:51:24
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hyphen007

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
考虑下连接条件、片段大小及各种成分的量
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4楼2013-08-05 15:24:40
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