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T载体连接不上去
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fanwq258
木虫
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[交流]
T载体连接不上去
自己扩增的基因,连接T载体就是连不上,但是买载体时带的插入片段可以连接上,这可该怎么办呢?
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2013-08-05 09:53:35
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9楼
:
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追梦草
at 2013-08-05 23:02:13
浓度再提高些,16度再多连会,会更有可能连上。我前一阵刚连上3900bp的片段,PCR产物胶回收柱浓度为400ng/ul,16度连了14h.
想请问您一下您的连接比例,我的目的片段3000-3500之间,连接做了一个月,没有结果。各种体系,比例,连接时间都尝试了,依然没成功。请不吝指教。
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23楼
2013-08-23 11:28:51
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gyesang
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你是什么酶扩出来的片段,如果是高保真酶的话,你考虑加A尾了吗?
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2楼
2013-08-05 13:35:34
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fanwq258
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2楼
:
Originally posted by
gyesang
at 2013-08-05 13:35:34
你是什么酶扩出来的片段,如果是高保真酶的话,你考虑加A尾了吗?
不是高保真的酶,用的就是宝生物普通的ex taq
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3楼
2013-08-05 14:51:24
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考虑下连接条件、片段大小及各种成分的量
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4楼
2013-08-05 15:24:40
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