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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR条带不亮求助
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

[交流] PCR条带不亮求助 已有8人参与

本人分子菜鸟一枚，PCR跑1%的琼脂糖电泳，第四泳道的条带不是很亮，求大神指点下！谢谢。。。
PCR过程：
95℃  5min
94℃  30s
55℃   30s
72℃   2.5min
72℃   7min
30个循环
PCR条带不亮求助
IMG_2510.JPG
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wangqi1107

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好好搞学术
1楼 2013-07-25 09:38:18
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

longrna

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-26 12:44:34
扩增效率不高条带就不亮。
可能是引物设计不好。调整退火温度等优化一下扩增体系以及条件。
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伟大航线....
5楼2013-07-25 15:33:34
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史前五百年

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 正解！ 2013-07-26 12:44:57
多问问你的师姐师兄这样他们有经验而且直接有效。
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9楼2013-07-26 10:00:49
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普通回帖

biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-25 14:28:09
你是说 PCR 产物量不够？你load了多少样品？

你的PCR产物是为了做什么？如果是分子克隆，产物足够的话（比如说胶上load了5ul 但是你总共有20ul)，应该问题不大。需要注意的反而是上面的那个非特异带。你可能要纯化一下你需要的条带

如果真是做克隆，担心量少的话，你就多做几个pcr，合在一起好了。
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2楼2013-07-25 11:17:02
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
好的！谢谢……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好好搞学术
3楼2013-07-25 13:32:26
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
你说的非特异性带是最头上那条吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好好搞学术
4楼2013-07-25 13:35:05
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hyphen007

金虫 (小有名气)
同意5楼
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6楼2013-07-25 23:07:12
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alicelchf

木虫 (著名写手)
★
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加样量呢？
就是反应体系如何？
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修身、齐家、治国、平天下
7楼2013-07-25 23:43:18
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
内容已删除
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好好搞学术
8楼2013-07-26 09:30:19
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denghengning

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
亲，你的目的条带是那一条呢？你可以尝试增加几个循环，（看你才跑30个循环啊）。如果目的条带还没有非特异性条带亮的话，建议你重新设计引物！
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10楼2013-07-26 14:12:32
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