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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR条带不亮求助
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

[交流] PCR条带不亮求助 已有8人参与

本人分子菜鸟一枚，PCR跑1%的琼脂糖电泳，第四泳道的条带不是很亮，求大神指点下！谢谢。。。
PCR过程：
95℃  5min
94℃  30s
55℃   30s
72℃   2.5min
72℃   7min
30个循环
PCR条带不亮求助
IMG_2510.JPG
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wangqi1107

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好好搞学术
1楼 2013-07-25 09:38:18
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-26 12:44:34
扩增效率不高条带就不亮。
可能是引物设计不好。调整退火温度等优化一下扩增体系以及条件。
赞一下(1人) 回复此楼
伟大航线....
5楼2013-07-25 15:33:34
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biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-25 14:28:09
你是说 PCR 产物量不够？你load了多少样品？

你的PCR产物是为了做什么？如果是分子克隆，产物足够的话（比如说胶上load了5ul 但是你总共有20ul)，应该问题不大。需要注意的反而是上面的那个非特异带。你可能要纯化一下你需要的条带

如果真是做克隆，担心量少的话，你就多做几个pcr，合在一起好了。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-25 11:17:02
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
好的！谢谢……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好好搞学术
3楼2013-07-25 13:32:26
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
你说的非特异性带是最头上那条吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好好搞学术
4楼2013-07-25 13:35:05
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