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lijianfu12

银虫 (正式写手)

[交流] PCR条带不亮求助已有8人参与

本人分子菜鸟一枚,PCR跑1%的琼脂糖电泳,第四泳道的条带不是很亮,求大神指点下!谢谢。。。
PCR过程:
95℃  5min
94℃  30s
55℃   30s
72℃   2.5min
72℃   7min
30个循环
PCR条带不亮求助
IMG_2510.JPG
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好好搞学术
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

好的!谢谢……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
好好搞学术
3楼2013-07-25 13:32:26
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

你说的非特异性带是最头上那条吗?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
好好搞学术
4楼2013-07-25 13:35:05
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by alicelchf at 2013-07-25 23:43:18
加样量呢?
就是反应体系如何?

电泳上样3微升,体系是按照takara的Taq酶说明书加的》
好好搞学术
8楼2013-07-26 09:30:19
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by denghengning at 2013-07-26 14:12:32
亲,你的目的条带是那一条呢?你可以尝试增加几个循环,(看你才跑30个循环啊)。如果目的条带还没有非特异性条带亮的话,建议你重新设计引物!

谢谢。。。是第四泳道的最头上那一条带!
好好搞学术
12楼2013-07-27 09:27:10
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-27 11:22:22
上面那么大的带,应该是模板吧!如果只load了5ul的话应该没多大问题,下次降低一点退火温度试试看,做个TD最好。good  luck

我P的基因就是差不多那样大的!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
好好搞学术
14楼2013-07-27 11:53:10
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