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[求助]
重组蛋白不挂his柱
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| 急求解决：我最近在纯化一个61K的蛋白，用PET32a/BL21的，在包涵体中表达，我用8M urea溶不掉，我就在里面加β-ME（1mM），好在是融了，但不挂NTA的柱子，求各位高见，本人不胜感激啊？我是用含20-500mM Imid 的Ttis-hcl 8.0 500mM Nacl 分布洗脱了，结果分析目标蛋白在流穿里面，而且比较纯……只是拿不到啊，我还专门用硫酸铵沉淀流穿，也拿不到（含有大量核酸），还有我纯化的另一个蛋白在上清里面（55k，表达量不高，），它是乎能和柱子结合（和之前挂不上的柱子是同一批买的），但也有问题：20-500mM Imid 的PBS 7.4 500mM Nacl 洗脱，目标蛋白在20, 100, 500mM Imid 洗脱液洗脱时出现，但杂蛋白很多，同求指导，万分焦急…… |
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2楼2013-08-05 10:17:50
zhangbighui
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