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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 6KD的蛋白跑western求大神帮助
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小WAY

铁虫 (初入文坛)

[求助] 6KD的蛋白跑western求大神帮助

自己表达的蛋白，flag标签的，4微克每微升上样是40微升（1:4的上样缓冲液），胶是18%,跑胶80V,2H,湿转100mA,2.5H.flag一抗浓度1:500（进口分装抗体）,4度过夜，二抗1:1000室温2H，一点光都没有，求做过小分子量蛋白的大神指点
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1楼 2013-07-24 18:21:55
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nanamaka

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-24 23:23:10
这个蛋白这么小，你用的什么膜？要注意膜的孔径，如果孔径很容易转出去，其他地方应该没有问题
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人生若只如初见
2楼2013-07-24 22:56:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-07-25 03:41:09
表达的蛋白上这么蛋白可以考虑染一下胶看看条带。蛋白比较小，膜的孔径大了容易转过。
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3楼2013-07-25 00:00:12
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小WAY

铁虫 (初入文坛)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2013-07-25 13:29:12
引用回帖:
2楼: Originally posted by nanamaka at 2013-07-24 22:56:41
这个蛋白这么小，你用的什么膜？要注意膜的孔径，如果孔径很容易转出去，其他地方应该没有问题

用的是0.44的，新买的0.22的还没用，蛋白的都快浪费完了
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4楼2013-07-25 11:29:52
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nanamaka

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
小WAY: 金币+1, ★有帮助 2013-07-28 12:00:46
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小WAY at 2013-07-25 11:29:52
用的是0.44的，新买的0.22的还没用，蛋白的都快浪费完了...

0.44肯定不行啊，小蛋白都能转过去，我们做western从来不用0.44um,试一下0.22um吧
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人生若只如初见
5楼2013-07-25 16:20:33
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zhaoxr0311

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议用小分子胶跑一下，可能会好一些，小分子胶的原理就是中间层会把大分子蛋白留住，小分子蛋白就跑到分离胶。
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6楼2013-08-28 16:44:54
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