[求助] RNA提取电泳效果不好

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也许似乎大概是，然而未必不见得

1楼2013-07-23 16:53:38

306495799

铁虫 (小有名气)

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3楼: Originally posted by 谢开龙 at 2013-07-24 00:13:05
个人认为，最容易使RNA降解的步骤是磨样的时候。一定保证加入第一次加入溶液前，组织处于冰冻状态。...

最下面那一条带是5s？还是从下到上第二条比较模糊的那一条？

也许似乎大概是，然而未必不见得

5楼2013-07-24 08:26:07

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lmcyjxs

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
306495799: 金币+40, ★★★很有帮助, 过程要在冰上放置吗？加入异丙醇是不是要轻轻颠倒混匀啊？ 2013-07-24 09:30:30
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 11:08:39

你的每个样品主要是有DNA的污染，你的是什么方法提的？试剂是不是自己配的？酚氯仿抽提液是你自己配的吗？如果是，注意酚要选水饱和酚。
1 你在每次取上清的时候，不要取到中间层，宁愿取少点，够用就行。看的图虽然有DNA污染，但是量是很丰富的。DNA也是溶在水相的，只是在靠近中间层那里。
2 电泳上样量不知你上多少，从第一个图的第一个条带来看，稍大了点，其他基本还好。
3 至于为什么这么多条带，我一时没有想明白，我觉得可能你在提取过程中，震荡过于剧烈造成的，不过这点不确定，你尝试着有些步骤不要振荡太剧烈，以免机械剪切力造成条带断裂。
4 出现这么多条带，还有可能是降解了。你操作过程中尽量注意环境卫生、温度把控，另外提取时，细菌的量不要太多，太多也会易降解的。
祝好！

思路决定出路。。。

2楼2013-07-23 18:36:56

谢开龙

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
306495799: 金币+10, ★★★很有帮助, 看一下我的前期提取过程有什么问题吗？ 2013-07-24 09:31:16
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-24 11:08:49

引用回帖:

2楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-07-23 18:36:56
你的每个样品主要是有DNA的污染，你的是什么方法提的？试剂是不是自己配的？酚氯仿抽提液是你自己配的吗？如果是，注意酚要选水饱和酚。
1 你在每次取上清的时候，不要取到中间层，宁愿取少点，够用就行。看的图虽 ...

个人认为，最容易使RNA降解的步骤是磨样的时候。一定保证加入第一次加入溶液前，组织处于冰冻状态。

3楼2013-07-24 00:13:05

lmcyjxs

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

你说的对，这点也很重要。

思路决定出路。。。

4楼2013-07-24 00:18:09