应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助关于PCR相关问题！
51/1返回列表
查看: 824  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

dingj1988

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助关于PCR相关问题！

各位前辈：
    大家好，请教个有关PCR相关问题！
    本人是学药化专业的，对生物了解的不太多！但是现在的工作是QC部门的，有一部分工作是做公司产品检测。
     最近做公司产品出产前要通过PCR检测其有无HIV,HCV，用的是深圳凯杰生物制品有限公司的试剂盒，产品是激素类生化产品，操作都是按照试剂盒说明书对样品前处理的，结果是到最后几个样品出现“抬头”迹象，而且空白对照也有“抬头迹象”，不知是哪里污染了。之前别人做的都是正常的，按说就算我的样品处理过程中污染了，那么空白就是加酶和反应液和水直接反应应该不会有污染的呀！试验中用到的枪和枪头什么的都是专用的，
这几天在排查原因也没头绪，好郁闷，忘各位前辈们大侠们提点好的建议，比较着急或是有什么好的推荐的资料何以推荐一下的，拜谢各位了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
做个内心强大的人！
1楼 2013-07-17 18:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
赞一下
5楼2013-07-31 19:31:37
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
查看全部 5 个回答

老伦敦把子肉

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dingj1988: 金币+16, ★★★很有帮助, 谢谢这位大侠！ 2013-07-17 23:58:42
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-18 22:07:27
你是指的荧光定量PCR吗？这个过程灵敏度很高的，有假阳性也正常，你首先看看“抬头”的样品的溶解曲线的峰的位置和阳性对照（如果你做了的话）是不是相同，如果相同才证明是目的基因，如果不相同，而且空白对照也有，那就考虑引物是不是不太好，可能会出现非特异性的扩增，换换引物试试。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-17 21:01:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingj1988

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 老伦敦把子肉 at 2013-07-17 21:01:23
你是指的荧光定量PCR吗？这个过程灵敏度很高的，有假阳性也正常，你首先看看“抬头”的样品的溶解曲线的峰的位置和阳性对照（如果你做了的话）是不是相同，如果相同才证明是目的基因，如果不相同，而且空白对照也有 ...

这位大侠，先感谢你给我回复！会给你送金币的！
   我做的就是荧光定量PCR，之前和我交接的一个同事从四月份开始做就有这种抬头，之前一直都是正常的为阴性，我现在做的HCV,HIV在35 个循环之前都还是好的，但是到了35个循环后就开始有点抬头了，一般HIV设置40个循环最后五个循环会抬头，HCV设置45个循环最后十个循环会有抬头迹象
   那你说的所谓抬头“抬头”的样品的溶解曲线的峰的位置和阳性对照（如果你做了的话）是不是相同，是指的是试剂盒中的阳性对照吗？峰的位置具体是指什么位置呢？本人愚钝不太明白，还望不吝赐教！每次都会做阳性对照标准曲线的！引物是试剂盒自带的，一般都在有效期内使用的！
  谢谢，麻烦了！
赞一下 回复此楼
做个内心强大的人！
3楼2013-07-17 23:55:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

老伦敦把子肉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dingj1988 at 2013-07-17 23:55:32
这位大侠，先感谢你给我回复！会给你送金币的！
   我做的就是荧光定量PCR，之前和我交接的一个同事从四月份开始做就有这种抬头，之前一直都是正常的为阴性，我现在做的HCV,HIV在35 个循环之前都还是好的，但是到 ...

抱歉 因出差没有上网 今天才看到 一般荧光定量PCR在30个循环之后的才出现的产物我们都认为是没有意义的，但是如果你经常出现也应该引起重视，我指的溶解曲线就是melting curve，是用来分析产物专一性的，所有荧光定量PCR程序最后都应该有这一步，我的意思是说，你的产物的溶解曲线是不是与试剂盒中阳性对照的溶解曲线在同一位置起峰，如果是，就说明是同一个产物，先判断这一点。
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-31 16:23:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +3 张vvvv 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:25 by 张vvvv
[考研] 环境工程调剂 +6 大可digkids 2026-03-16 6/300 2026-03-16 17:16 by barlinike
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 机械专硕调剂 +3 笨笨兔子 2026-03-12 3/150 2026-03-15 20:02 by 栗子粥?
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭