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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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dingj1988

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助关于PCR相关问题！

各位前辈：
    大家好，请教个有关PCR相关问题！
    本人是学药化专业的，对生物了解的不太多！但是现在的工作是QC部门的，有一部分工作是做公司产品检测。
     最近做公司产品出产前要通过PCR检测其有无HIV,HCV，用的是深圳凯杰生物制品有限公司的试剂盒，产品是激素类生化产品，操作都是按照试剂盒说明书对样品前处理的，结果是到最后几个样品出现“抬头”迹象，而且空白对照也有“抬头迹象”，不知是哪里污染了。之前别人做的都是正常的，按说就算我的样品处理过程中污染了，那么空白就是加酶和反应液和水直接反应应该不会有污染的呀！试验中用到的枪和枪头什么的都是专用的，
这几天在排查原因也没头绪，好郁闷，忘各位前辈们大侠们提点好的建议，比较着急或是有什么好的推荐的资料何以推荐一下的，拜谢各位了！
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做个内心强大的人！
1楼 2013-07-17 18:44:40
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dingj1988

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 老伦敦把子肉 at 2013-07-17 21:01:23
你是指的荧光定量PCR吗？这个过程灵敏度很高的，有假阳性也正常，你首先看看“抬头”的样品的溶解曲线的峰的位置和阳性对照（如果你做了的话）是不是相同，如果相同才证明是目的基因，如果不相同，而且空白对照也有 ...

这位大侠，先感谢你给我回复！会给你送金币的！
   我做的就是荧光定量PCR，之前和我交接的一个同事从四月份开始做就有这种抬头，之前一直都是正常的为阴性，我现在做的HCV,HIV在35 个循环之前都还是好的，但是到了35个循环后就开始有点抬头了，一般HIV设置40个循环最后五个循环会抬头，HCV设置45个循环最后十个循环会有抬头迹象
   那你说的所谓抬头“抬头”的样品的溶解曲线的峰的位置和阳性对照（如果你做了的话）是不是相同，是指的是试剂盒中的阳性对照吗？峰的位置具体是指什么位置呢？本人愚钝不太明白，还望不吝赐教！每次都会做阳性对照标准曲线的！引物是试剂盒自带的，一般都在有效期内使用的！
  谢谢，麻烦了！
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做个内心强大的人！
3楼2013-07-17 23:55:32
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老伦敦把子肉

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dingj1988: 金币+16, ★★★很有帮助, 谢谢这位大侠！ 2013-07-17 23:58:42
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-18 22:07:27
你是指的荧光定量PCR吗？这个过程灵敏度很高的，有假阳性也正常，你首先看看“抬头”的样品的溶解曲线的峰的位置和阳性对照（如果你做了的话）是不是相同，如果相同才证明是目的基因，如果不相同，而且空白对照也有，那就考虑引物是不是不太好，可能会出现非特异性的扩增，换换引物试试。
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2楼2013-07-17 21:01:23
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老伦敦把子肉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dingj1988 at 2013-07-17 23:55:32
这位大侠，先感谢你给我回复！会给你送金币的！
   我做的就是荧光定量PCR，之前和我交接的一个同事从四月份开始做就有这种抬头，之前一直都是正常的为阴性，我现在做的HCV,HIV在35 个循环之前都还是好的，但是到 ...

抱歉 因出差没有上网 今天才看到 一般荧光定量PCR在30个循环之后的才出现的产物我们都认为是没有意义的，但是如果你经常出现也应该引起重视，我指的溶解曲线就是melting curve，是用来分析产物专一性的，所有荧光定量PCR程序最后都应该有这一步，我的意思是说，你的产物的溶解曲线是不是与试剂盒中阳性对照的溶解曲线在同一位置起峰，如果是，就说明是同一个产物，先判断这一点。
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4楼2013-07-31 16:23:42
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匿名

用户注销 (著名写手)
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5楼2013-07-31 19:31:37
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