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dingj1988

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助关于PCR相关问题!

各位前辈:
    大家好,请教个有关PCR相关问题!
    本人是学药化专业的,对生物了解的不太多!但是现在的工作是QC部门的,有一部分工作是做公司产品检测。
     最近做公司产品出产前要通过PCR检测其有无HIV,HCV,用的是深圳凯杰生物制品有限公司的试剂盒,产品是激素类生化产品,操作都是按照试剂盒说明书对样品前处理的,结果是到最后几个样品出现“抬头”迹象,而且空白对照也有“抬头迹象”,不知是哪里污染了。之前别人做的都是正常的,按说就算我的样品处理过程中污染了,那么空白就是加酶和反应液和水直接反应应该不会有污染的呀!试验中用到的枪和枪头什么的都是专用的,
这几天在排查原因也没头绪,好郁闷,忘各位前辈们大侠们提点好的建议,比较着急或是有什么好的推荐的资料何以推荐一下的,拜谢各位了!
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dingj1988

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 老伦敦把子肉 at 2013-07-17 21:01:23
你是指的荧光定量PCR吗?这个过程灵敏度很高的,有假阳性也正常,你首先看看“抬头”的样品的溶解曲线的峰的位置和阳性对照(如果你做了的话)是不是相同,如果相同才证明是目的基因,如果不相同,而且空白对照也有 ...

这位大侠,先感谢你给我回复!会给你送金币的!
   我做的就是荧光定量PCR,之前和我交接的一个同事从四月份开始做就有这种抬头,之前一直都是正常的为阴性,我现在做的HCV,HIV在35 个循环之前都还是好的,但是到了35个循环后就开始有点抬头了,一般HIV设置40个循环最后五个循环会抬头,HCV设置45个循环最后十个循环会有抬头迹象
   那你说的所谓抬头“抬头”的样品的溶解曲线的峰的位置和阳性对照(如果你做了的话)是不是相同,是指的是试剂盒中的阳性对照吗?峰的位置具体是指什么位置呢?本人愚钝不太明白,还望不吝赐教!每次都会做阳性对照标准曲线的!引物是试剂盒自带的,一般都在有效期内使用的!
  谢谢,麻烦了!
做个内心强大的人!
3楼2013-07-17 23:55:32
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