应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母转化验证方法
161/2返回列表12下一页
查看: 2711  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

piaoyunokok

木虫 (正式写手)

[交流] 酵母转化验证方法 已有5人参与

一般质粒转入酵母后，要怎样验证是否成功转入呢？质粒上插入的片段在基因组上也有，而且转入后也以质粒形式存在的。
都要提取质粒的话，工作量确实挺大的。而且我提取质粒后做PCR，虽然有条带，但是条带大小不对啊。。。，有的去测序，结果和基因组上的某个基因是一样的（质粒上的启动子是该基因的），郁闷啊。。。不知道是什么原因
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-16 21:12:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肃清华书

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以选择培养基里面进行培养，你提取PCR条带怎么能不对呢。。估计是产物的浓度小了所以提取看不到吧。。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-16 21:52:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最靠谱的方法就是把质粒提取出来测序。
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-16 23:19:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-07-16 21:52:57
可以选择培养基里面进行培养，你提取PCR条带怎么能不对呢。。估计是产物的浓度小了所以提取看不到吧。。

是在选择培养基上培养的。条带位置确实不对，而且还挺亮的 呢。。。
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-17 00:13:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-07-16 23:19:00
最靠谱的方法就是把质粒提取出来测序。

浓度可能比较低或者什么原因吧，转入大肠都不长
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-17 00:13:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20083630zhan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的目的基因在质粒和基因组上都有，有可能在你转化的时候，质粒上的基因与基因组上的基因重组了
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-17 09:32:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-07-17 09:32:46
你的目的基因在质粒和基因组上都有，有可能在你转化的时候，质粒上的基因与基因组上的基因重组了

理论上讲，是有这个可能。但是PCR的条带大小及测序结果都说明不是啊，就是基因组上的另一个基因。。。
赞一下 回复此楼
7楼2013-07-17 10:04:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20083630zhan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by piaoyunokok at 2013-07-17 10:04:03
理论上讲，是有这个可能。但是PCR的条带大小及测序结果都说明不是啊，就是基因组上的另一个基因。。。...

你可以分别将基因组和质粒提出来，分别PCR，看看跑胶的条带
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-17 11:05:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heroxuning

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
设计特殊PCR引物，可以避免和基因组的相似片段混淆。
赞一下 回复此楼
9楼2013-07-18 09:05:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyunokok

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by heroxuning at 2013-07-18 09:05:18
设计特殊PCR引物，可以避免和基因组的相似片段混淆。

做个类似这样的实验，姑且先把质粒上启动子的基因称为A，插入的 目的基因称为B。试着用A的上游引物和B的下游引物做PCR，可是出现了一个更神奇的事情————转入的构建好的载体PCR条带位置正确，但是转入的原有质粒，即未插入B基因的质粒，PCR条带居然和它一样！！！真是百思不得其解。。。。
赞一下 回复此楼
10楼2013-07-18 09:46:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 piaoyunokok 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 科研孤儿太难了 +15 我4大白菜 2026-08-20 16/800 2026-08-21 11:07 by yming1319
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭