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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酵母转化中LiAC-PEG如何溶解
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骚人追月

金虫 (小有名气)

[求助] 酵母转化中LiAC-PEG如何溶解

各位老师，大家好。
最近小弟做酵母转化时，前人留下的Li-PEG刚好用完，然后自己兴致勃勃的进行配制。谁曾想天不遂人愿，溶解PEG的过程就相当纠结，最终呈现一个比较浊的状态，也不像没溶解，就像是很浓很均匀的鼻涕。。。灭菌之后也是如此。因为之前没有转出来， 所以有点儿小阴影。不知道这种状态的Li-PEG会不会影响酵母的转化。
请高手赐教。
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会做饭就会做实验？
1楼 2011-12-06 10:44:50
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骚人追月

金虫 (小有名气)
没人回答我呢，自己顶个。。
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会做饭就会做实验？
2楼2011-12-06 15:44:12
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greenhope3371

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 感谢参与 2011-12-10 10:52:46
这个不会影响转化，我们一般用50%的PEG(w/v， MW 3350, Sigma P3640)配，就是很稠，所以吸取的时候是将1ml枪头前端用灭菌剪刀剪掉一截，这样便于吸取，而且体积不会改变。不过存放的时候一定要拧紧盖子，否则长时间蒸发容易提高浓度，从而影响转化效率，祝你好运！
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努力
3楼2011-12-09 21:05:02
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冰山来啦

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 鼓励下 2011-12-10 10:52:56
放心，一点问题没有，要的就是这个效果，不粘稠的话酵母细胞很容易在30度孵育时聚沉下来，可根据2楼办法，配置50%PEG
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4楼2011-12-09 21:35:32
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与，欢迎常来 2011-12-10 10:53:13
我使用的也是sigma PEG 3350，50%PEG确实很难溶解，不过多振摇一段时间也就差不多了。另外，50%PEG溶液最好过滤除菌，高压灭菌影响最终浓度，会导致实验失败。
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
5楼2011-12-10 00:40:11
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vcvcvc

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-12-10 10:53:24
PEG要抽滤除菌，高压灭菌会打断结构，影响转化效率
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6楼2011-12-10 08:53:06
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gandalf886

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以考虑买现成的，北京有个公司叫泛诺基，有酵母醋酸锂转化的全套试剂，不贵
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7楼2011-12-10 16:30:00
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vickievickie

铜虫 (初入文坛)
同问，昨天配Li-PEG折腾了一天，早上用磁力搅拌器搅拌，然后又用热水加热搅拌，下午还高压灭菌，结果今天还是浑浑的
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祝我的实验一发不可收拾
8楼2012-04-12 09:46:28
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冰冰冰

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
LiAC和PEG要分别配制，用之前再混合。
10倍的LiAC溶液，高温高压灭菌。
PEG3350用热水溶解，冷却后定容成50%的浓度，高温高压灭菌。
我是这么做的，没有问题。祝你成功
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9楼2012-04-12 10:40:46
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shjia

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我每次都是只配20ml 50%的PEG，称10gPEG,加大概5ml水，然后放在60℃烘箱里放20分钟，就可以全部溶解成透明的粘稠状，再加水定容到20ml，然后115℃灭菌就可以用了。
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10楼2012-07-26 17:59:59
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