12楼: Originally posted by piaoyunokok at 2013-07-18 12:18:19
插入B基因后，测过序的，结果是对的。转酵母时，没有插入B基因的原载体也做了对照的。你说的阴性对照是指的那种呢？...

13楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-19 01:37:49
如果你的载体构建后通过测序没有问题，那么就肯定没有问题了，现在就检测你的载体是否成功转入。在此，首先你转化的时候记得做阴性对照（1 不加入载体，2 加入空载（该对照对于你将来蛋白表达的时候也是需要的）） ...

14楼: Originally posted by piaoyunokok at 2013-07-19 10:29:20
嗯，这两个对照都有的。不过不加载体的不是同时做的，是之前探索抗生素浓度时做的。后来转化的就涂布在不加载体的菌株不生长的浓度下，然后挑的菌。质粒做PCR，不过没有提取基因组呢，这个是必须的吗？谢谢
    另 ...

15楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-20 00:13:21
一般来说提取基因组是没有必要，但鉴于你这种特殊情况才建议你提取。因为gDNA比质粒大很多，序列自然也复杂很多，所以当你引物对质粒模板特异扩展的时候，并不代表其在质粒和gDNA混合模板中一定是特异扩增。这样做 ...