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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

[交流] 酵母转化验证方法已有5人参与

一般质粒转入酵母后,要怎样验证是否成功转入呢?质粒上插入的片段在基因组上也有,而且转入后也以质粒形式存在的。
都要提取质粒的话,工作量确实挺大的。而且我提取质粒后做PCR,虽然有条带,但是条带大小不对啊。。。,有的去测序,结果和基因组上的某个基因是一样的(质粒上的启动子是该基因的),郁闷啊。。。不知道是什么原因
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-19 01:37:49
如果你的载体构建后通过测序没有问题,那么就肯定没有问题了,现在就检测你的载体是否成功转入。在此,首先你转化的时候记得做阴性对照(1 不加入载体,2 加入空载(该对照对于你将来蛋白表达的时候也是需要的)) ...

嗯,这两个对照都有的。不过不加载体的不是同时做的,是之前探索抗生素浓度时做的。后来转化的就涂布在不加载体的菌株不生长的浓度下,然后挑的菌。质粒做PCR,不过没有提取基因组呢,这个是必须的吗?谢谢
    另外,你睡觉这么晚啊?呵呵
14楼2013-07-19 10:29:20
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肃清华书

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以选择培养基里面进行培养,你提取PCR条带怎么能不对呢。。估计是产物的浓度小了所以提取看不到吧。。
2楼2013-07-16 21:52:57
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最靠谱的方法就是把质粒提取出来测序。
3楼2013-07-16 23:19:00
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 肃清华书 at 2013-07-16 21:52:57
可以选择培养基里面进行培养,你提取PCR条带怎么能不对呢。。估计是产物的浓度小了所以提取看不到吧。。

是在选择培养基上培养的。条带位置确实不对,而且还挺亮的 呢。。。
4楼2013-07-17 00:13:11
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