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piaoyunokok

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[交流] 酵母转化验证方法已有5人参与

一般质粒转入酵母后，要怎样验证是否成功转入呢？质粒上插入的片段在基因组上也有，而且转入后也以质粒形式存在的。
都要提取质粒的话，工作量确实挺大的。而且我提取质粒后做PCR，虽然有条带，但是条带大小不对啊。。。，有的去测序，结果和基因组上的某个基因是一样的（质粒上的启动子是该基因的），郁闷啊。。。不知道是什么原因

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1楼 2013-07-16 21:12:37

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piaoyunokok

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引用回帖:

13楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-19 01:37:49
如果你的载体构建后通过测序没有问题，那么就肯定没有问题了，现在就检测你的载体是否成功转入。在此，首先你转化的时候记得做阴性对照（1 不加入载体，2 加入空载（该对照对于你将来蛋白表达的时候也是需要的）） ...

嗯，这两个对照都有的。不过不加载体的不是同时做的，是之前探索抗生素浓度时做的。后来转化的就涂布在不加载体的菌株不生长的浓度下，然后挑的菌。质粒做PCR，不过没有提取基因组呢，这个是必须的吗？谢谢
另外，你睡觉这么晚啊？呵呵