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银虫 (小有名气)

[求助] 荧光PCR扩增

做荧光PCR检测时。一直比较稳定。最近出现内参基因表达量远低于目的基因的状况。请大家帮忙指点下，有哪些可能的原因呢。（注：1.有些样本确实是目的基因表达量高，但是我做的样本不应该是这样子的结果。2.不可能是加样原因，因为我一批做不同的样本，有的表达量就正常。3.提取的RNA浓度跟纯度也还正常。）

1楼 2013-07-16 10:52:41

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铜虫 (初入文坛)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-16 13:58:36

现在天气热，很有可能是因为在反复冻融的过程中有所降解，建议你可以重新弄一批样品试试，引物也有可能出现类似的问题，换新的引物试试。也有可能是仪器本身出现问题，某些孔坏了什么的。

2楼2013-07-16 11:10:15

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铜虫 (小有名气)

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感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-17 03:29:50

首先，先确认你是否用的是竞争性内参，如果是竞争性内参，在样本浓度（目的基因）很高的情况下，内参是会出现不表达或表达的不够强的现象。

让自己变得更强

3楼2013-07-16 17:05:01

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