24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2613  |  回复: 4

hxm007199

铁虫 (初入文坛)

[求助] 荧光PCR探针特异性不足如何优化?

阴性阳性DNA模板的上游下游引物都是一样的,但是探针中间有两个连续的碱基不同
理论上,探针有一个不同就没有信号了
但是,实际结果是:阳性模板CT值为23,阴性模板CT值28(二步法,60度退火延伸)
然后我又把退火温度提高到61度和62度,结果阳性CT值不变,阴性模板CT值29,30

请问一下,有什么优化方法可以提高特异性,让阴性模板没有扩增曲线?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

生可忍,熟不可忍!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-28 13:21:46
很难区分的了,不知道你探针多长,你在中间不同,也许在5‘端就已经有信号了,或许挪下位置试试
2楼2013-09-28 11:31:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-28 20:37:03
重新设计引物,让引物的3‘端同阴性模板不匹配(一两个碱基就行)。试试竞争PCR(估计效果不能太好)
3楼2013-09-28 16:19:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxm007199

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-09-28 11:31:59
很难区分的了,不知道你探针多长,你在中间不同,也许在5‘端就已经有信号了,或许挪下位置试试

探针24个碱基
现在的情况是,引物探针没有挪动的余地,希望通过改变条件,来抑制非特异扩增
生可忍,熟不可忍!
4楼2013-09-30 14:10:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by hxm007199 at 2013-09-30 14:10:34
探针24个碱基
现在的情况是,引物探针没有挪动的余地,希望通过改变条件,来抑制非特异扩增...

那就探针往后挪点位置,尽量把突变的点在前面
5楼2013-09-30 15:30:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hxm007199 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854求调剂 +6 亨氏番茄沙司 2026-04-06 7/350 2026-04-06 16:38 by 蓝云思雨
[考研] 0703化学 +9 goldtt 2026-04-02 11/550 2026-04-06 10:35 by 无际的草原
[考研] 一志愿西安交大材料学硕(英一数二)347,求调剂到高分子/材料相关专业 +8 zju51 2026-03-31 10/500 2026-04-06 09:03 by 醉翁wl
[考研] 复试调剂 +13 呼呼?~+123456 2026-04-05 13/650 2026-04-05 22:07 by 醉翁wl
[考研] 0854电子信息319求调剂(接受跨专业调剂) +3 星星不眨眼喽 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:20 by 啵啵啵0119
[考研] 290求调剂 +7 luoziheng 2026-04-04 7/350 2026-04-04 23:17 by lqwchd
[考研] 338求调剂 +7 晟功? 2026-04-03 7/350 2026-04-04 20:37 by 蓝云思雨
[考研] 0703求调剂 +6 zizimo 2026-03-31 6/300 2026-04-04 14:16 by 无际的草原
[考研] 085701求调剂 +7 龚禹铭 2026-04-04 8/400 2026-04-04 13:49 by 小小树2024
[考研] 0856调剂 +8 曲听筠 2026-03-30 8/400 2026-04-04 08:46 by tianyyysss
[考研] 400分求调剂 +3 尴尬且挠头 2026-04-04 3/150 2026-04-04 08:41 by jp9609
[考研] 311求调剂 +11 勇敢的小吴 2026-04-02 11/550 2026-04-03 21:46 by qlm5820
[考研] 求调剂 +4 压力??大 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:36 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +7 困困困困坤坤 2026-04-02 7/350 2026-04-03 17:26 by Yuena_Wang
[考研] 0705理学294求调剂 +3 成果成果cg5 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:04 by simons1972
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +15 秋二十二 2026-03-30 15/750 2026-04-03 10:19 by linyelide
[考研] 一志愿a区211,085601-307分求调剂 +13 党嘉豪 2026-03-31 26/1300 2026-04-03 08:33 by 495374996
[考研] 农学考研求调剂 +3 dkdkxm 2026-04-01 3/150 2026-04-02 16:04 by wangjagri
[考研] 372求调剂 +3 jj涌77 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:57 by olim
[考研] 08生物与医药专硕初试346找调剂 +6 dianeeee 2026-04-01 7/350 2026-04-02 08:23 by guoweigw
信息提示
请填处理意见