应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » taqman 探针PCR信号居高不下什么原因
111/2返回列表12下一页
查看: 3568  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

子非鱼花儿开

新虫 (初入文坛)

[求助] taqman 探针PCR信号居高不下什么原因 已有2人参与

最近做taqman 探针法PCR，荧光信号很高，且没有变化曲线。但用sybr green作对照，相同的体系能够跑出来扩增曲线。怀疑是合成的探针淬灭基团没连上，把另外一组没有溶解的干粉送回去检测也没问题。难道是稀释后探针降解了，但稀释是用的高压灭菌PH8.0的TE缓冲液，稀释完就低温保存，才一两个星期的时间应该不至于讲解啊，即使用水也不会那么容易降解的。求大神给指点迷津？非常感谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-26 16:14:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xieshitao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by huangchj03 at 2015-01-21 11:01:27
这样的情况我也遇到过，采用的是TAMRA-BHQ2，换了荧光基团标记后就好了，最后怀疑是上海生工标记的问题，还没给我解决这个问题。
我自己总结可能有以下原因：第一荧光标记出现了问题，第二Taqman探针的Tm偏低，与引 ...

我最近也遇到了这种情况，也怀疑是探针基团的问题，想问一下后面是找哪个公司合成探针了呢，之前我在华大基因和金维智合成过，都是刚开始合成的探针还可以用，后面合成的就出现了这个问题，不知哪个公司的探针质量比较有保障，毕竟他们合成探针之后也是测一下分子量和纯度而已，没有直接用到qPCR上来验证
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2018-02-23 16:11:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

love_st

金虫 (著名写手)
上图上图
回复此楼
2楼2013-09-26 16:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子非鱼花儿开

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-09-26 16:19:22
上图上图

图如下
taqman 探针PCR信号居高不下什么原因
sybr green 组


taqman 探针PCR信号居高不下什么原因-1
taqman组


taqman 探针PCR信号居高不下什么原因-2
黄色为sybrgreen，其他为taqman组
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-26 16:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
估计是探针不给力，连接不上
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-26 16:44:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子非鱼花儿开

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by love_st at 2013-09-26 16:44:09
估计是探针不给力，连接不上

如果是探针信号低倒好解释，但主要是用别的方法测定发现探针一开始荧光信号就很强，基本没有淬灭。而且相同的序列别人都发nature了
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-26 16:51:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-27 09:53:46
一个体系无法预想的扩增有很多因素，我一开始就觉得探针可能无法工作，虽然发nature，只是按我的经验所有的序列只能是参考，我从来不直接应用，我更相信自己设计的，所以如果你排除不是探针的问题，那么你要给出你体系其它的应用条件，不然无法分析
赞一下 回复此楼
6楼2013-09-27 08:50:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangchj03

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这样的情况我也遇到过，采用的是TAMRA-BHQ2，换了荧光基团标记后就好了，最后怀疑是上海生工标记的问题，还没给我解决这个问题。
我自己总结可能有以下原因：第一荧光标记出现了问题，第二Taqman探针的Tm偏低，与引物的Tm接近。仅供参考
赞一下 回复此楼
7楼2015-01-21 11:01:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xieshitao

新虫 (小有名气)
不知楼主最后怎么解决的呢，最近也是遇到这样的问题，Taqman探针法，CT值变化不大，但是标曲是可以看到趋势的
赞一下 回复此楼
8楼2018-02-23 11:57:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a410598571

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by xieshitao at 2018-02-23 16:11:39
我最近也遇到了这种情况，也怀疑是探针基团的问题，想问一下后面是找哪个公司合成探针了呢，之前我在华大基因和金维智合成过，都是刚开始合成的探针还可以用，后面合成的就出现了这个问题，不知哪个公司的探针质量 ...

最近做taqman 探针法PCR，荧光信号很高，且没有变化曲线。但用sybr green作对照，相同的体系能够跑出来扩增曲线。和楼主出现问题一样，到现在还没有解决。不知道怎么办 你是怎么解决的呢
赞一下 回复此楼
我在过马路，你人在哪里
10楼2018-07-31 16:06:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 子非鱼花儿开 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭