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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用Taqman探针法做qPCR，结果很差，求高手指导
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fanfan3570

新虫 (初入文坛)

[求助] 用Taqman探针法做qPCR，结果很差，求高手指导 已有1人参与

用Taqman探针法做qPCR，引物和探针都是参考的文献来得，之前用这个引物做过简单的PCR，是单一条带，但做qPCR结果很差，见附件中的图。探针换另外一个公司合成以后，结果还是没有好转，体系变化了结果也没有变化，跪求高手指导呀

Amplification Plot.jpg
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1楼 2013-05-18 20:33:49
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yuyixst

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fanfan3570(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-19 10:23:33
如果体系没有问题的话，就是探针不行呗，岂能相信文献
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2楼2013-05-18 20:49:20
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卓尔why

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
像是没扩增出来，但曲线还连在一起，是不是你的模板浓度太高了啊
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3楼2013-05-21 10:54:22
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26264716

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuyixst at 2013-05-18 20:49:20
如果体系没有问题的话，就是探针不行呗，岂能相信文献

你哭着对他说，文献里都是骗人的，你不可能做出那结果。。哈哈
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苦，才是人生
4楼2013-05-21 14:28:51
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fanfan3570

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 卓尔why at 2013-05-21 10:54:22
像是没扩增出来，但曲线还连在一起，是不是你的模板浓度太高了啊

模板浓度不高呀，20ng左右
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5楼2013-05-21 16:59:10
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哎呀那个雨

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你使用的模板是质粒还是基因组DNA，我最近也做这个，出现过你这种问题，20ng太多了，你不能用普通PCR的标准来做Q-PCR实验，如果是质粒模板，你可以梯度稀释一下；如果是基因组DNA，最好还是再稀释一下。如果你最终排除了模板问题，建议你提高一下退火温度。
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啊
6楼2015-07-30 16:07:44
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