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子非鱼花儿开

新虫 (初入文坛)

[求助] taqman 探针PCR信号居高不下什么原因 已有2人参与

最近做taqman 探针法PCR,荧光信号很高,且没有变化曲线。但用sybr green作对照,相同的体系能够跑出来扩增曲线。怀疑是合成的探针淬灭基团没连上,把另外一组没有溶解的干粉送回去检测也没问题。难道是稀释后探针降解了,但稀释是用的高压灭菌PH8.0的TE缓冲液,稀释完就低温保存,才一两个星期的时间应该不至于讲解啊,即使用水也不会那么容易降解的。求大神给指点迷津?非常感谢
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huangchj03

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这样的情况我也遇到过,采用的是TAMRA-BHQ2,换了荧光基团标记后就好了,最后怀疑是上海生工标记的问题,还没给我解决这个问题。
我自己总结可能有以下原因:第一荧光标记出现了问题,第二Taqman探针的Tm偏低,与引物的Tm接近。仅供参考
7楼2015-01-21 11:01:27
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