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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » taqman 探针PCR信号居高不下什么原因
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子非鱼花儿开

新虫 (初入文坛)

[求助] taqman 探针PCR信号居高不下什么原因 已有2人参与

最近做taqman 探针法PCR，荧光信号很高，且没有变化曲线。但用sybr green作对照，相同的体系能够跑出来扩增曲线。怀疑是合成的探针淬灭基团没连上，把另外一组没有溶解的干粉送回去检测也没问题。难道是稀释后探针降解了，但稀释是用的高压灭菌PH8.0的TE缓冲液，稀释完就低温保存，才一两个星期的时间应该不至于讲解啊，即使用水也不会那么容易降解的。求大神给指点迷津？非常感谢
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1楼 2013-09-26 16:14:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xieshitao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by huangchj03 at 2015-01-21 11:01:27
这样的情况我也遇到过，采用的是TAMRA-BHQ2，换了荧光基团标记后就好了，最后怀疑是上海生工标记的问题，还没给我解决这个问题。
我自己总结可能有以下原因：第一荧光标记出现了问题，第二Taqman探针的Tm偏低，与引 ...

我最近也遇到了这种情况，也怀疑是探针基团的问题，想问一下后面是找哪个公司合成探针了呢，之前我在华大基因和金维智合成过，都是刚开始合成的探针还可以用，后面合成的就出现了这个问题，不知哪个公司的探针质量比较有保障，毕竟他们合成探针之后也是测一下分子量和纯度而已，没有直接用到qPCR上来验证
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9楼2018-02-23 16:11:39
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love_st

金虫 (著名写手)
上图上图
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2楼2013-09-26 16:19:22
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子非鱼花儿开

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2013-09-26 16:19:22
上图上图

图如下
taqman 探针PCR信号居高不下什么原因
sybr green 组


taqman 探针PCR信号居高不下什么原因-1
taqman组


taqman 探针PCR信号居高不下什么原因-2
黄色为sybrgreen，其他为taqman组
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3楼2013-09-26 16:42:14
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
估计是探针不给力，连接不上
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4楼2013-09-26 16:44:09
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子非鱼花儿开

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by love_st at 2013-09-26 16:44:09
估计是探针不给力，连接不上

如果是探针信号低倒好解释，但主要是用别的方法测定发现探针一开始荧光信号就很强，基本没有淬灭。而且相同的序列别人都发nature了
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5楼2013-09-26 16:51:16
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-27 09:53:46
一个体系无法预想的扩增有很多因素，我一开始就觉得探针可能无法工作，虽然发nature，只是按我的经验所有的序列只能是参考，我从来不直接应用，我更相信自己设计的，所以如果你排除不是探针的问题，那么你要给出你体系其它的应用条件，不然无法分析
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6楼2013-09-27 08:50:08
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huangchj03

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这样的情况我也遇到过，采用的是TAMRA-BHQ2，换了荧光基团标记后就好了，最后怀疑是上海生工标记的问题，还没给我解决这个问题。
我自己总结可能有以下原因：第一荧光标记出现了问题，第二Taqman探针的Tm偏低，与引物的Tm接近。仅供参考
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7楼2015-01-21 11:01:27
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xieshitao

新虫 (小有名气)
不知楼主最后怎么解决的呢，最近也是遇到这样的问题，Taqman探针法，CT值变化不大，但是标曲是可以看到趋势的
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8楼2018-02-23 11:57:55
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a410598571

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by xieshitao at 2018-02-23 16:11:39
我最近也遇到了这种情况，也怀疑是探针基团的问题，想问一下后面是找哪个公司合成探针了呢，之前我在华大基因和金维智合成过，都是刚开始合成的探针还可以用，后面合成的就出现了这个问题，不知哪个公司的探针质量 ...

最近做taqman 探针法PCR，荧光信号很高，且没有变化曲线。但用sybr green作对照，相同的体系能够跑出来扩增曲线。和楼主出现问题一样，到现在还没有解决。不知道怎么办 你是怎么解决的呢
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我在过马路，你人在哪里
10楼2018-07-31 16:06:16
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