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子非鱼花儿开

新虫 (初入文坛)

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[求助] taqman 探针PCR信号居高不下什么原因已有2人参与

最近做taqman 探针法PCR，荧光信号很高，且没有变化曲线。但用sybr green作对照，相同的体系能够跑出来扩增曲线。怀疑是合成的探针淬灭基团没连上，把另外一组没有溶解的干粉送回去检测也没问题。难道是稀释后探针降解了，但稀释是用的高压灭菌PH8.0的TE缓冲液，稀释完就低温保存，才一两个星期的时间应该不至于讲解啊，即使用水也不会那么容易降解的。求大神给指点迷津？非常感谢

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1楼 2013-09-26 16:14:35

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xieshitao

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by huangchj03 at 2015-01-21 11:01:27
这样的情况我也遇到过，采用的是TAMRA-BHQ2，换了荧光基团标记后就好了，最后怀疑是上海生工标记的问题，还没给我解决这个问题。
我自己总结可能有以下原因：第一荧光标记出现了问题，第二Taqman探针的Tm偏低，与引 ...

我最近也遇到了这种情况，也怀疑是探针基团的问题，想问一下后面是找哪个公司合成探针了呢，之前我在华大基因和金维智合成过，都是刚开始合成的探针还可以用，后面合成的就出现了这个问题，不知哪个公司的探针质量比较有保障，毕竟他们合成探针之后也是测一下分子量和纯度而已，没有直接用到qPCR上来验证