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sjj50520032597

银虫 (小有名气)

[求助] 荧光PCR扩增

做荧光PCR检测时。一直比较稳定。最近出现内参基因表达量远低于目的基因的状况。请大家帮忙指点下,有哪些可能的原因呢。(注:1.有些样本确实是目的基因表达量高,但是我做的样本不应该是这样子的结果。2.不可能是加样原因,因为我一批做不同的样本,有的表达量就正常。3.提取的RNA浓度跟纯度也还正常。)
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a86267397

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-16 13:58:36
现在天气热,很有可能是因为在反复冻融的过程中有所降解,建议你可以重新弄一批样品试试,引物也有可能出现类似的问题,换新的引物试试。也有可能是仪器本身出现问题,某些孔坏了什么的。
2楼2013-07-16 11:10:15
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宋虫虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-17 03:29:50
首先,先确认你是否用的是竞争性内参,如果是竞争性内参,在样本浓度(目的基因)很高的情况下,内参是会出现不表达或表达的不够强的现象。
让自己变得更强
3楼2013-07-16 17:05:01
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