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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请教内切酶的不同U是什么意思？酶切时对用量有什么影响？

分子新手请教
我刚从上海生工定的两个酶，XhoI和BglII。它俩的包装规格分别是2000U和500U，不知道这对酶切时的用量是什么？
能说下双酶切的话具体加多少吗？我看我们实验室用的都是20uL的体系。
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加油！
1楼 2013-07-10 18:49:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
飞鸟and唐山: 金币+2, ★有帮助 2013-07-11 09:49:52
引用回帖:
6楼: Originally posted by 飞鸟and唐山 at 2013-07-11 08:59:59
我不知道要切多少ug怎么办啊？师兄说提出来的质粒直接用，他用的是10uL，加1uL的酶。我问他浓度他也不知道啊。...

其实不用计较那么多，如果没有测定核酸浓度的仪器，很难知道样品质粒有多少ug。只要酶没有星号活性，选用两种酶活性相当的一种buffer（说明书里有的），按照你的你师兄的体系2-3h 完全OK啦！
10ul 体系加1ul 酶是很多的啦，我一般在25ul 体系加1ul 酶都切很好的。
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
7楼2013-07-11 09:32:32
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普通回帖

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
飞鸟and唐山(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-10 20:35:51
这个单位是总量，你需要看看每ul的U是多少。我做实验的话一般双酶切切3ug的质粒的话会加1.5ul的酶。酶切时间的话，你要查一下这两个酶在buffer里的活性。
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2楼2013-07-10 19:16:21
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 正解！ 2013-07-12 01:41:00
U是酶活单位，具体看产品说明的定义。
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为什么
3楼2013-07-10 21:44:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
飞鸟and唐山: 金币+2, ★有帮助 2013-07-11 09:49:41
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！解决楼主问题 2013-07-12 01:41:30
U是酶活力单位，指在37°C作用1小时完全切割1μg λ DNA的酶量为1U。包装规格说的是酶的总活力，你还要看酶的浓度为多少U/μl。20μl酶切体系一般切质粒/DNA1μg，加10U切1-3小时。
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4楼2013-07-11 07:16:38
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！很好的建议哈！ 2013-07-12 01:52:33
楼上说的是对的。
你可以按照你所用的DNA量去计算你要用的酶的量，不过不要过量，否则可能会出现一些副作用，例如星号活性等等。同时注意你的酶所使用的buffer。
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5楼2013-07-11 08:36:26
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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-11 07:16:38
U是酶活力单位，指在37°C作用1小时完全切割1μg λ DNA的酶量为1U。包装规格说的是酶的总活力，你还要看酶的浓度为多少U/μl。20μl酶切体系一般切质粒/DNA1μg，加10U切1-3小时。

我不知道要切多少ug怎么办啊？师兄说提出来的质粒直接用，他用的是10uL，加1uL的酶。我问他浓度他也不知道啊。
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加油！
6楼2013-07-11 08:59:59
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514278815

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

酶切时间根据酶的效率来说的，有快速酶切的；一般酶切体系质粒浓度50ng/μl，酶切可以比说明书上稍微长一点，但不可过长，不然会出现糊状现象。
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8楼2013-07-11 09:52:59
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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xbl3688 at 2013-07-11 09:32:32
其实不用计较那么多，如果没有测定核酸浓度的仪器，很难知道样品质粒有多少ug。只要酶没有星号活性，选用两种酶活性相当的一种buffer（说明书里有的），按照你的你师兄的体系2-3h 完全OK啦！
10ul 体系加1ul 酶是 ...

您好，我想再问下那个酶切时间是怎么定的？我看有人多鉴定2-3小时，用来连接的话过夜。为什么不一样呢？还有时间过长会有什么副作用吗，会产生型号活力吗？
多谢指教！
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加油！
9楼2013-07-11 09:53:41
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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-07-10 19:16:21
这个单位是总量，你需要看看每ul的U是多少。我做实验的话一般双酶切切3ug的质粒的话会加1.5ul的酶。酶切时间的话，你要查一下这两个酶在buffer里的活性。

您好，请问酶切时间的话具体要怎么确定啊？我查的推荐buffer里，两个酶一个是百分之100，一个是50-100，时间的话应该是多少呢？
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加油！
10楼2013-07-11 10:17:35
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