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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请教内切酶的不同U是什么意思?酶切时对用量有什么影响?

分子新手请教
我刚从上海生工定的两个酶,XhoI和BglII。它俩的包装规格分别是2000U和500U,不知道这对酶切时的用量是什么?
能说下双酶切的话具体加多少吗?我看我们实验室用的都是20uL的体系。
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飞鸟and唐山: 金币+2, 有帮助 2013-07-11 09:49:52
引用回帖:
6楼: Originally posted by 飞鸟and唐山 at 2013-07-11 08:59:59
我不知道要切多少ug怎么办啊?师兄说提出来的质粒直接用,他用的是10uL,加1uL的酶。我问他浓度他也不知道啊。...

其实不用计较那么多,如果没有测定核酸浓度的仪器,很难知道样品质粒有多少ug。只要酶没有星号活性,选用两种酶活性相当的一种buffer(说明书里有的),按照你的你师兄的体系2-3h 完全OK啦!
10ul 体系加1ul 酶是很多的啦,我一般在25ul 体系加1ul 酶都切很好的。
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
7楼2013-07-11 09:32:32
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普通回帖

yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
飞鸟and唐山(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-10 20:35:51
这个单位是总量,你需要看看每ul的U是多少。我做实验的话一般双酶切切3ug的质粒的话会加1.5ul的酶。酶切时间的话,你要查一下这两个酶在buffer里的活性。
2楼2013-07-10 19:16:21
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 正解! 2013-07-12 01:41:00
U是酶活单位,具体看产品说明的定义。
为什么
3楼2013-07-10 21:44:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飞鸟and唐山: 金币+2, 有帮助 2013-07-11 09:49:41
gyesang: 金币+2, 鼓励应助!解决楼主问题 2013-07-12 01:41:30
U是酶活力单位,指在37°C作用1小时完全切割1μg λ DNA的酶量为1U。包装规格说的是酶的总活力,你还要看酶的浓度为多少U/μl。20μl酶切体系一般切质粒/DNA1μg,加10U切1-3小时。
4楼2013-07-11 07:16:38
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助!很好的建议哈! 2013-07-12 01:52:33
楼上说的是对的。
你可以按照你所用的DNA量去计算你要用的酶的量,不过不要过量,否则可能会出现一些副作用,例如星号活性等等。同时注意你的酶所使用的buffer。
5楼2013-07-11 08:36:26
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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-11 07:16:38
U是酶活力单位,指在37°C作用1小时完全切割1μg λ DNA的酶量为1U。包装规格说的是酶的总活力,你还要看酶的浓度为多少U/μl。20μl酶切体系一般切质粒/DNA1μg,加10U切1-3小时。

我不知道要切多少ug怎么办啊?师兄说提出来的质粒直接用,他用的是10uL,加1uL的酶。我问他浓度他也不知道啊。
加油!
6楼2013-07-11 08:59:59
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514278815

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

酶切时间根据酶的效率来说的,有快速酶切的;一般酶切体系质粒浓度50ng/μl,酶切可以比说明书上稍微长一点,但不可过长,不然会出现糊状现象。
8楼2013-07-11 09:52:59
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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xbl3688 at 2013-07-11 09:32:32
其实不用计较那么多,如果没有测定核酸浓度的仪器,很难知道样品质粒有多少ug。只要酶没有星号活性,选用两种酶活性相当的一种buffer(说明书里有的),按照你的你师兄的体系2-3h 完全OK啦!
10ul 体系加1ul 酶是 ...

您好,我想再问下那个酶切时间是怎么定的?我看有人多鉴定2-3小时,用来连接的话过夜。为什么不一样呢?还有时间过长会有什么副作用吗,会产生型号活力吗?
多谢指教!
加油!
9楼2013-07-11 09:53:41
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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-07-10 19:16:21
这个单位是总量,你需要看看每ul的U是多少。我做实验的话一般双酶切切3ug的质粒的话会加1.5ul的酶。酶切时间的话,你要查一下这两个酶在buffer里的活性。

您好,请问酶切时间的话具体要怎么确定啊?我查的推荐buffer里,两个酶一个是百分之100,一个是50-100,时间的话应该是多少呢?
加油!
10楼2013-07-11 10:17:35
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