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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教内切酶的不同U是什么意思？酶切时对用量有什么影响？
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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请教内切酶的不同U是什么意思？酶切时对用量有什么影响？

分子新手请教
我刚从上海生工定的两个酶，XhoI和BglII。它俩的包装规格分别是2000U和500U，不知道这对酶切时的用量是什么？
能说下双酶切的话具体加多少吗？我看我们实验室用的都是20uL的体系。
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加油！
1楼 2013-07-10 18:49:17
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xbl3688

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
飞鸟and唐山: 金币+2, ★有帮助 2013-07-11 09:49:52
引用回帖:
6楼: Originally posted by 飞鸟and唐山 at 2013-07-11 08:59:59
我不知道要切多少ug怎么办啊？师兄说提出来的质粒直接用，他用的是10uL，加1uL的酶。我问他浓度他也不知道啊。...

其实不用计较那么多，如果没有测定核酸浓度的仪器，很难知道样品质粒有多少ug。只要酶没有星号活性，选用两种酶活性相当的一种buffer（说明书里有的），按照你的你师兄的体系2-3h 完全OK啦！
10ul 体系加1ul 酶是很多的啦，我一般在25ul 体系加1ul 酶都切很好的。
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
7楼2013-07-11 09:32:32
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xbl3688

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 飞鸟and唐山 at 2013-07-11 09:53:41
您好，我想再问下那个酶切时间是怎么定的？我看有人多鉴定2-3小时，用来连接的话过夜。为什么不一样呢？还有时间过长会有什么副作用吗，会产生型号活力吗？
多谢指教！...

用来连接的话，是怕载体不能完全切开 转化后出现假阳性，所以才多切一些时间。这个2-3小时是个经验值，对于某些效率不高的酶还要适当延长。
酶切过夜是可以，如果你时间充足的话。少数情况下会切成抹带。
星号活性一般是因为甘油浓度高，酶量太多，金属离子浓度等问题，这种东西在你尝试后，遇见了才会有体会。 去试试吧，祝你好运！
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15楼2013-07-12 08:53:46
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