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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请教内切酶的不同U是什么意思?酶切时对用量有什么影响?

分子新手请教
我刚从上海生工定的两个酶,XhoI和BglII。它俩的包装规格分别是2000U和500U,不知道这对酶切时的用量是什么?
能说下双酶切的话具体加多少吗?我看我们实验室用的都是20uL的体系。
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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xbl3688 at 2013-07-11 09:32:32
其实不用计较那么多,如果没有测定核酸浓度的仪器,很难知道样品质粒有多少ug。只要酶没有星号活性,选用两种酶活性相当的一种buffer(说明书里有的),按照你的你师兄的体系2-3h 完全OK啦!
10ul 体系加1ul 酶是 ...

您好,我想再问下那个酶切时间是怎么定的?我看有人多鉴定2-3小时,用来连接的话过夜。为什么不一样呢?还有时间过长会有什么副作用吗,会产生型号活力吗?
多谢指教!
加油!
9楼2013-07-11 09:53:41
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
飞鸟and唐山(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-10 20:35:51
这个单位是总量,你需要看看每ul的U是多少。我做实验的话一般双酶切切3ug的质粒的话会加1.5ul的酶。酶切时间的话,你要查一下这两个酶在buffer里的活性。
2楼2013-07-10 19:16:21
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 正解! 2013-07-12 01:41:00
U是酶活单位,具体看产品说明的定义。
为什么
3楼2013-07-10 21:44:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
飞鸟and唐山: 金币+2, 有帮助 2013-07-11 09:49:41
gyesang: 金币+2, 鼓励应助!解决楼主问题 2013-07-12 01:41:30
U是酶活力单位,指在37°C作用1小时完全切割1μg λ DNA的酶量为1U。包装规格说的是酶的总活力,你还要看酶的浓度为多少U/μl。20μl酶切体系一般切质粒/DNA1μg,加10U切1-3小时。
4楼2013-07-11 07:16:38
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