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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教内切酶的不同U是什么意思？酶切时对用量有什么影响？
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飞鸟and唐山

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请教内切酶的不同U是什么意思？酶切时对用量有什么影响？

分子新手请教
我刚从上海生工定的两个酶，XhoI和BglII。它俩的包装规格分别是2000U和500U，不知道这对酶切时的用量是什么？
能说下双酶切的话具体加多少吗？我看我们实验室用的都是20uL的体系。
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加油！
1楼 2013-07-10 18:49:17
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xbl3688

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 飞鸟and唐山 at 2013-07-11 09:53:41
您好，我想再问下那个酶切时间是怎么定的？我看有人多鉴定2-3小时，用来连接的话过夜。为什么不一样呢？还有时间过长会有什么副作用吗，会产生型号活力吗？
多谢指教！...

用来连接的话，是怕载体不能完全切开 转化后出现假阳性，所以才多切一些时间。这个2-3小时是个经验值，对于某些效率不高的酶还要适当延长。
酶切过夜是可以，如果你时间充足的话。少数情况下会切成抹带。
星号活性一般是因为甘油浓度高，酶量太多，金属离子浓度等问题，这种东西在你尝试后，遇见了才会有体会。 去试试吧，祝你好运！
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
15楼2013-07-12 08:53:46
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
飞鸟and唐山(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-10 20:35:51
这个单位是总量，你需要看看每ul的U是多少。我做实验的话一般双酶切切3ug的质粒的话会加1.5ul的酶。酶切时间的话，你要查一下这两个酶在buffer里的活性。
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2楼2013-07-10 19:16:21
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 正解！ 2013-07-12 01:41:00
U是酶活单位，具体看产品说明的定义。
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为什么
3楼2013-07-10 21:44:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
飞鸟and唐山: 金币+2, ★有帮助 2013-07-11 09:49:41
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！解决楼主问题 2013-07-12 01:41:30
U是酶活力单位，指在37°C作用1小时完全切割1μg λ DNA的酶量为1U。包装规格说的是酶的总活力，你还要看酶的浓度为多少U/μl。20μl酶切体系一般切质粒/DNA1μg，加10U切1-3小时。
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4楼2013-07-11 07:16:38
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