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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 飞鸟and唐山 at 2013-07-11 10:17:35
您好,请问酶切时间的话具体要怎么确定啊?我查的推荐buffer里,两个酶一个是百分之100,一个是50-100,时间的话应该是多少呢?...

我个人觉得可以酶切过夜。
11楼2013-07-11 10:42:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 飞鸟and唐山 at 2013-07-11 08:59:59
我不知道要切多少ug怎么办啊?师兄说提出来的质粒直接用,他用的是10uL,加1uL的酶。我问他浓度他也不知道啊。...

你的质粒浓度可以用nanodrip检测一下。没有的话可以跑胶与marker带对比估测浓度。
12楼2013-07-11 11:08:28
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yanfang2012

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lwiaanngg at 2013-07-11 08:36:26
楼上说的是对的。
你可以按照你所用的DNA量去计算你要用的酶的量,不过不要过量,否则可能会出现一些副作用,例如星号活性等等。同时注意你的酶所使用的buffer。

请问星号活性什么意思
believe yourself!
13楼2013-07-11 19:29:54
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by yanfang2012 at 2013-07-11 19:29:54
请问星号活性什么意思...

https://en.wikipedia.org/wiki/Star_activity
14楼2013-07-12 08:16:02
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xbl3688

银虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 飞鸟and唐山 at 2013-07-11 09:53:41
您好,我想再问下那个酶切时间是怎么定的?我看有人多鉴定2-3小时,用来连接的话过夜。为什么不一样呢?还有时间过长会有什么副作用吗,会产生型号活力吗?
多谢指教!...

用来连接的话,是怕载体不能完全切开 转化后出现假阳性,所以才多切一些时间。这个2-3小时是个经验值,对于某些效率不高的酶还要适当延长。
酶切过夜是可以,如果你时间充足的话。少数情况下会切成抹带。
星号活性一般是因为甘油浓度高,酶量太多,金属离子浓度等问题,这种东西在你尝试后,遇见了才会有体会。 去试试吧,祝你好运!
生活的乐趣在于善于发现美,学会欣赏美
15楼2013-07-12 08:53:46
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