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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教内切酶的不同U是什么意思？酶切时对用量有什么影响？
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 飞鸟and唐山 at 2013-07-11 10:17:35
您好，请问酶切时间的话具体要怎么确定啊？我查的推荐buffer里，两个酶一个是百分之100，一个是50-100，时间的话应该是多少呢？...

我个人觉得可以酶切过夜。
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11楼2013-07-11 10:42:37
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 飞鸟and唐山 at 2013-07-11 08:59:59
我不知道要切多少ug怎么办啊？师兄说提出来的质粒直接用，他用的是10uL，加1uL的酶。我问他浓度他也不知道啊。...

你的质粒浓度可以用nanodrip检测一下。没有的话可以跑胶与marker带对比估测浓度。
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12楼2013-07-11 11:08:28
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yanfang2012

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lwiaanngg at 2013-07-11 08:36:26
楼上说的是对的。
你可以按照你所用的DNA量去计算你要用的酶的量，不过不要过量，否则可能会出现一些副作用，例如星号活性等等。同时注意你的酶所使用的buffer。

请问星号活性什么意思
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believe yourself！
13楼2013-07-11 19:29:54
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by yanfang2012 at 2013-07-11 19:29:54
请问星号活性什么意思...

https://en.wikipedia.org/wiki/Star_activity
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14楼2013-07-12 08:16:02
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xbl3688

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 飞鸟and唐山 at 2013-07-11 09:53:41
您好，我想再问下那个酶切时间是怎么定的？我看有人多鉴定2-3小时，用来连接的话过夜。为什么不一样呢？还有时间过长会有什么副作用吗，会产生型号活力吗？
多谢指教！...

用来连接的话，是怕载体不能完全切开 转化后出现假阳性，所以才多切一些时间。这个2-3小时是个经验值，对于某些效率不高的酶还要适当延长。
酶切过夜是可以，如果你时间充足的话。少数情况下会切成抹带。
星号活性一般是因为甘油浓度高，酶量太多，金属离子浓度等问题，这种东西在你尝试后，遇见了才会有体会。 去试试吧，祝你好运！
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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美
15楼2013-07-12 08:53:46
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