24小时热门版块排行榜

返回列表

melisax

新虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 575.4
帖子: 38
在线: 5.3小时
虫号: 2089456
注册: 2012-10-27
专业: 生物化学

[求助] T4酶切连接求助！

最近在做酶切连接，我用的载体上的多克隆位点，SALI和HIND3酶切切开之后与目的片段连接，目的片段也是用同样的酶从T载上切下来的，载体和片段都做了胶回收也跑过胶看过亮度了，浓度还可以的，然后按1比10体系加，T4连接过夜。我做了好久了平板上一点也不长。确认酶什么的都是没有问题的别人做都很正常，感受态我也换过几次也不长，用商业化的感受态也不长，平板抗生素也都是没有问题的。现在抓狂了，到底问题出在哪里都不知道，求大神解答！谢谢！！！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

pET28a双酶切后连接目的基因，什么也不长。。。已经有23人回复
双酶切之后，线状质粒的连接问题已经有13人回复
谁用过Fermentas的T4连接酶？已经有23人回复
T4连接酶连接问题已经有7人回复
求助双酶切验证阳性克隆的问题已经有12人回复
求助！请问 NdeI 和EcoRI 同时做酶切可以吗？已经有3人回复
【求助/交流】关于重组质粒的构建，总是失败，希望高手指点一下啊～～已经有16人回复
【求助/交流】请教个关于inverse PCR的问题已经有21人回复
【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题已经有13人回复
【求助/交流】连接产物，是否可以直接做PCR模板？已经有17人回复
【求助/交流】PEGFP-N1与目的条带连不上已经有6人回复
【求助/交流】克隆Amp/Kan选择以及蓝白筛选已经有10人回复
【求助/交流】表达载体构建不成功的原因已经有27人回复
【求助/交流】单酶切连接的克隆急…… 已经有10人回复
【求助/交流】以连接产物做模板扩增此连接产物，有问题请教各位达人~麻烦您帮忙分析下已经有9人回复

1楼 2013-06-19 23:48:32

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

melisax

新虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 575.4
帖子: 38
在线: 5.3小时
虫号: 2089456
注册: 2012-10-27
专业: 生物化学

一开始我怀疑载体自连或者酶切不干净，可是这样也起码会长假阳性吧，可是我的平板就是空的什么都没有。我的片段测过序了，酶切位点没有问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

赞一下

回复此楼

2楼2013-06-19 23:50:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

MolEPI: 10
应助: 1662 (讲师)
金币: 8693.8
红花: 72
帖子: 3516
在线: 456小时
虫号: 1614001
注册: 2012-02-13
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melisax(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-20 09:06:26

转化时要多做点对照便于分析。关于T4连接酶的对照，一般有载体双酶切自连、单酶切自连的对照。感受态的对照最好也做一下，就是转个同样抗性的质粒，确定转化步骤和操作没有问题。

赞一下

回复此楼

3楼2013-06-20 00:47:38

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖