应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T4酶切连接求助！
181/2返回列表12下一页
查看: 1627  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

melisax

新虫 (初入文坛)

[求助] T4酶切连接求助！

最近在做酶切连接，我用的载体上的多克隆位点，SALI和HIND3酶切切开之后与目的片段连接，目的片段也是用同样的酶从T载上切下来的，载体和片段都做了胶回收也跑过胶看过亮度了，浓度还可以的，然后按1比10体系加，T4连接过夜。我做了好久了平板上一点也不长。确认酶什么的都是没有问题的别人做都很正常，感受态我也换过几次也不长，用商业化的感受态也不长，平板抗生素也都是没有问题的。现在抓狂了，到底问题出在哪里都不知道，求大神解答！谢谢！！！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-06-19 23:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melisax

新虫 (初入文坛)
一开始我怀疑载体自连或者酶切不干净，可是这样也起码会长假阳性吧，可是我的平板就是空的什么都没有。我的片段测过序了，酶切位点没有问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-19 23:50:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melisax(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-20 09:06:26
转化时要多做点对照便于分析。关于T4连接酶的对照，一般有载体双酶切自连、单酶切自连的对照。感受态的对照最好也做一下，就是转个同样抗性的质粒，确定转化步骤和操作没有问题。
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-20 00:47:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是呀！做不出来最好做一下对照！
试试超感吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-20 06:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
melisax(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:28:02
既然这样，建议你尝试一下：
1. 分别以片段：载体的不同比例做2-3个体系同时连接；
2. 不知道你是多少度连接的？可以16度过夜转一次，剩下的继续放4度一段时间后再转
赞一下 回复此楼
岂能尽如人意，但求无愧我心
5楼2013-06-20 09:56:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:28:14
我的感觉是T4可能出问题了，去其他实验室借1ul，试验一下就是了
赞一下 回复此楼
★穷则独善其身,达则兼济天下★
6楼2013-06-20 11:04:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melisax

新虫 (初入文坛)
楼上说的对照啊酶啊这些问题都排除了。。。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
7楼2013-06-21 23:24:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melisax

新虫 (初入文坛)
可能是体系问题，我再试下吧。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
8楼2013-06-21 23:24:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaozhou0904

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-22 08:28:31
胶回收后要测dna回收到的浓度，然后做到绝对定量！链接的温度控制在16℃，过夜链接！
赞一下 回复此楼
9楼2013-06-22 00:11:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaozhou0904

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

胶回收后要测dna回收到的浓度，然后做到绝对定量！链接的温度控制在16℃，过夜链接！
赞一下 回复此楼
10楼2013-06-22 00:11:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 melisax 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +9 大米饭！ 2026-03-15 12/600 2026-03-16 21:59 by 大米饭！
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 材料与化工专硕调剂 +3 heming3743 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:05 by peike
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭