24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1703  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

melisax

新虫 (初入文坛)

[求助] T4酶切连接求助!

最近在做酶切连接,我用的载体上的多克隆位点,SALI和HIND3酶切切开之后与目的片段连接,目的片段也是用同样的酶从T载上切下来的,载体和片段都做了胶回收也跑过胶看过亮度了,浓度还可以的,然后按1比10体系加,T4连接过夜。我做了好久了平板上一点也不长。确认酶什么的都是没有问题的别人做都很正常,感受态我也换过几次也不长,用商业化的感受态也不长,平板抗生素也都是没有问题的。现在抓狂了,到底问题出在哪里都不知道,求大神解答!谢谢!!!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaozhou0904

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

胶回收后要测dna回收到的浓度,然后做到绝对定量!链接的温度控制在16℃,过夜链接!
10楼2013-06-22 00:11:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

melisax

新虫 (初入文坛)

一开始我怀疑载体自连或者酶切不干净,可是这样也起码会长假阳性吧,可是我的平板就是空的什么都没有。我的片段测过序了,酶切位点没有问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2013-06-19 23:50:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
melisax(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-20 09:06:26
转化时要多做点对照便于分析。关于T4连接酶的对照,一般有载体双酶切自连、单酶切自连的对照。感受态的对照最好也做一下,就是转个同样抗性的质粒,确定转化步骤和操作没有问题。
3楼2013-06-20 00:47:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是呀!做不出来最好做一下对照!
试试超感吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-06-20 06:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[考研] 0854求调剂 +24 门路摸摸 2026-04-15 28/1400 2026-04-22 09:54 by Sy199704!
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +7 随心所欲☆ 2026-04-15 8/400 2026-04-21 08:22 by Equinoxhua
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 期刊推荐 +3 材料研究生 2026-04-15 5/250 2026-04-20 16:02 by 豆豆7758
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
信息提示
请填处理意见