应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T4酶切连接求助！
51/1返回列表
查看: 2181  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

melisax

新虫 (初入文坛)

[求助] T4酶切连接求助！

最近在做酶切连接，我用的载体上的多克隆位点，SALI和HIND3酶切切开之后与目的片段连接，目的片段也是用同样的酶从T载上切下来的，载体和片段都做了胶回收也跑过胶看过亮度了，浓度还可以的，然后按1比10体系加，T4连接过夜。我做了好久了平板上一点也不长。确认酶什么的都是没有问题的别人做都很正常，感受态我也换过几次也不长，用商业化的感受态也不长，平板抗生素也都是没有问题的。现在抓狂了，到底问题出在哪里都不知道，求大神解答！谢谢！！！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-06-19 23:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-26 12:28:14
我的感觉是T4可能出问题了，去其他实验室借1ul，试验一下就是了
赞一下 回复此楼
★穷则独善其身,达则兼济天下★
6楼2013-06-20 11:04:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

melisax

新虫 (初入文坛)
一开始我怀疑载体自连或者酶切不干净，可是这样也起码会长假阳性吧，可是我的平板就是空的什么都没有。我的片段测过序了，酶切位点没有问题。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-19 23:50:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
melisax(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-20 09:06:26
转化时要多做点对照便于分析。关于T4连接酶的对照，一般有载体双酶切自连、单酶切自连的对照。感受态的对照最好也做一下，就是转个同样抗性的质粒，确定转化步骤和操作没有问题。
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-20 00:47:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是呀！做不出来最好做一下对照！
试试超感吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-20 06:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +9 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-09 10:50 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-09 10:23 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-09 10:18 by Equinoxhua
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 16/800 2026-11-09 06:54 by l48hFd8Nwae2
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 13/650 2026-11-09 06:50 by l48hFd8Nwae2
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭