24小时热门版块排行榜    

查看: 2800  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

kikiwitch

新虫 (初入文坛)

[交流] SDS-PAGE跑膜蛋白为什么会这样 已有3人参与

第一次跑膜蛋白,用的是TRITON 来溶解的,用的是10%的胶,为什么感觉大部分蛋白都挤在上部分了。

另外,因为我要检测的是cytochrome,细胞色素在菌体的的表达,所以用专门的方法染了一下细胞色素,见下图,从左到右2,4两条是我的sample,其他是control(没有转质粒进去的野生菌株),感觉确实蓝色条带加深了,但都挤在了胶最上方,不知道为什么。

新手发帖,没有金币悬赏,实在抱歉啊。
SDS-PAGE跑膜蛋白为什么会这样
SDS.jpg


SDS-PAGE跑膜蛋白为什么会这样-1
heme staining.jpg

[ Last edited by kikiwitch on 2013-5-23 at 16:28 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

edoz1986

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by kikiwitch at 2013-05-23 17:44:51
但是我查的文献里有这么说的:
(DDM), Triton X-100 (TX-100) and Triton X-114 (TX-114) are commonly used for solubilization of membranes when keeping protein structure and function intact。。。

:sh ...

去污剂的提取能力需要做小试取最佳
6楼2013-05-23 20:08:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

edoz1986

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-23 18:47:08
你的膜蛋白应该没有提取出来,还是在细胞膜上吧!在对膜蛋白进行纯化和纯化的时候,要用去污剂将蛋白与细胞膜进行分离,并在去污剂溶解的状态下进行纯化,纯化后膜蛋除去白去污剂再进行重构。你用的triton应该不能(或很少)提取溶解吧!
2楼2013-05-23 17:12:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

edoz1986

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-23 18:48:02
引用回帖:
2楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-23 17:12:01
你的膜蛋白应该没有提取出来,还是在细胞膜上吧!在对膜蛋白进行纯化和纯化的时候,要用去污剂将蛋白与细胞膜进行分离,并在去污剂溶解的状态下进行纯化,纯化后膜蛋除去白去污剂再进行重构。你用的triton应该不能( ...

可以用ddm来溶解膜蛋白,你溶解的时候破碎了吗?
3楼2013-05-23 17:25:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kikiwitch

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by edoz1986 at 2013-05-23 17:25:33
可以用ddm来溶解膜蛋白,你溶解的时候破碎了吗?...

是的,我先超声将细胞破碎后,用ultracentrifugation方法将上清与膜分开,之后用
5% wt/vol Triton X-100, 50 mM Hepes pH 7.4, 200 mM NaCl 溶液进行溶解。
4楼2013-05-23 17:38:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[考研] 085600材料与化工调剂 +8 A-哆啦Z梦 2026-03-23 13/650 2026-03-24 21:05 by greychen00
[考研] 收08调剂生 +6 komorebi69 2026-03-18 6/300 2026-03-24 19:09 by 汪!?!
[考研] 070300化学求调剂 +9 苑豆豆 2026-03-20 9/450 2026-03-24 17:15 by licg0208
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考博] 申博26年 +4 八6八68 2026-03-19 4/200 2026-03-24 15:49 by 小Ben呵呵
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华东理工大学081700,初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +3 gdlf9999 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:08 by 搏击518
[考研] 求材料,环境专业调剂 +3 18567500178 2026-03-18 3/150 2026-03-23 23:50 by 热情沙漠
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 考研化学308分求调剂 +7 你好明天你好 2026-03-23 8/400 2026-03-23 18:39 by macy2011
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 一志愿华中科技大学071000,求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见