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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒转化是假阳性！！求助
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kefengni

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒转化是假阳性！！求助

最近做个质粒转化，转了几次，平板上菌是长了，但是挑菌做PCR就P不出。抽出的质粒和原始菌液都做过PCR，条带是正确的。我还拿质粒去测序，也是正确的。但就是做质粒转化后就P不出了。我转的是DH5α，载体是PET21a。让别人给我做过，结果也是一样。感受态是商用的，应该不会有染菌的现象。
不知道什么原因，求助啊！！！！
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1楼 2013-05-23 09:14:50
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那你为什么不认为你是PCR的愿意一定说是质粒“假阳性”（没有听过的名字）。菌落PCR中是否所有对照都加了，确保这个PCR体系与程序没有问题。我想还是你菌落PCR的问题，好好加入对照吧，菌是否挑到，起始变性时间一般为5min 对细胞作为模板。
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2楼2013-05-23 10:29:00
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lieblingli

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-23 10:29:00
那你为什么不认为你是PCR的愿意一定说是质粒“假阳性”（没有听过的名字）。菌落PCR中是否所有对照都加了，确保这个PCR体系与程序没有问题。我想还是你菌落PCR的问题，好好加入对照吧，菌是否挑到，起始变性时间一般 ...

对照都有p过，只加了引物未加模版的没有P出。加了原始菌液的可以P出。
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3楼2013-05-23 10:48:49
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