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kefengni

铜虫 (初入文坛)

[求助] 质粒转化是假阳性!!求助

最近做个质粒转化,转了几次,平板上菌是长了,但是挑菌做PCR就P不出。抽出的质粒和原始菌液都做过PCR,条带是正确的。我还拿质粒去测序,也是正确的。但就是做质粒转化后就P不出了。我转的是DH5α,载体是PET21a。让别人给我做过,结果也是一样。感受态是商用的,应该不会有染菌的现象。
不知道什么原因,求助啊!!!!
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那你为什么不认为你是PCR的愿意一定说是质粒“假阳性”(没有听过的名字)。菌落PCR中是否所有对照都加了,确保这个PCR体系与程序没有问题。我想还是你菌落PCR的问题,好好加入对照吧,菌是否挑到,起始变性时间一般为5min 对细胞作为模板。
2楼2013-05-23 10:29:00
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lieblingli

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-23 10:29:00
那你为什么不认为你是PCR的愿意一定说是质粒“假阳性”(没有听过的名字)。菌落PCR中是否所有对照都加了,确保这个PCR体系与程序没有问题。我想还是你菌落PCR的问题,好好加入对照吧,菌是否挑到,起始变性时间一般 ...

对照都有p过,只加了引物未加模版的没有P出。加了原始菌液的可以P出。
3楼2013-05-23 10:48:49
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