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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 【求助/交流】质粒转化
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jiaojiaoning

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】质粒转化已有8人参与

我最近一直在做基因克隆，把pET28a转化进去DH5α之后，涂到含有50μg/mL的卡纳LB平板上，结果阴性对照也长了菌。请教各位这到底是哪里出了问题。谢谢。。。
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1楼2011-04-07 09:47:13
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qiangfeng

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-07 14:02:18
可能原因有：
1. 卡纳霉素失效
2. 实验操作过程中造成杂菌污染
3. 也可能是你在进行实验的过程中，把涂板用转化菌弄混了，两个板上涂的都是同一种菌（含有抗生素的）

个人观点，仅供参考！！！！
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顺势而行，问心无愧！
2楼2011-04-07 10:48:59
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问你的阴性对照是怎么做的？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-04-07 11:44:25
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-07 14:02:36
阴性对照也长菌是很正常的。一般做阴性对照，也是为了看看背景有多少。
如果实验组长的菌比阴性对照长的菌多得多（5倍以上，大概看看就行），那就没有问题了。
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4楼2011-04-07 12:36:43
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jiaojiaoning

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-07 11:44:25:
请问你的阴性对照是怎么做的？

就是用水代替质粒，按照同样的步骤操作。
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5楼2011-04-07 15:24:40
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-07 20:01:54
引用回帖:
Originally posted by jiaojiaoning at 2011-04-07 15:24:40:
就是用水代替质粒，按照同样的步骤操作。

用水代替质粒进行转化？阴性对照应该是不含质粒的DH5α涂布在KAN的板子上吧？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2011-04-07 15:53:18
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-07 20:02:07
引用回帖:
Originally posted by jiaojiaoning at 2011-04-07 15:24:40:
就是用水代替质粒，按照同样的步骤操作。

阴性对照是不含质粒的DH5α涂布在Kanamycin的板子上吗？这样的话应该是不长菌的。
1. 抗生素浓度是否正确？抗生素是否过期？
2. 操作过程中，有无失误？比如都涂成阳性菌或是转化时都加成了阳性质粒。
3. 你做板子的时候，加抗生素时LB温度过高，灭活了抗生素。
4. 板子太旧....
先想这么多，以后再补充
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生活是美好的
7楼2011-04-07 16:09:48
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jiaojiaoning

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-07 12:36:43:
阴性对照也长菌是很正常的。一般做阴性对照，也是为了看看背景有多少。
如果实验组长的菌比阴性对照长的菌多得多（5倍以上，大概看看就行），那就没有问题了。

好的，谢谢这位朋友！
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8楼2011-04-07 17:28:00
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郝钊

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不知道你的感受态细胞有没有问题，我之前做了一批感受态细胞，也是DH5α，悲剧的是我做感受态细胞的原始菌株是一个师兄已经转化过了的，所以阴性对照长满了平板。
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9楼2011-04-07 17:29:36
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的kana浓度加到50ug/ul？
怎么pET手册上是15-30ug/ul呢？
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10楼2011-04-08 15:30:42
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