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wangjunwiner金虫 (初入文坛)
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[求助]
烟草反转录PCR 求助
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我要做烟草的反转录PCR，检测一种酶在RNA水平的转录量。但是我是一个新手，上面也没有人指导。所有的东西都要重新购买 求各位网友从购买需要的试剂，耗材开始指导下 。我要从提取总RNA开始做。PCR出来相关酶的表达量和一个内参。 再次感谢大家。 |
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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本人都是用从生物公司（艾德莱）买的植物RNA专用试剂盒——《RNApure超纯总RNA快速提取试剂盒》，提过几次，效果都很好。提取后做RT-PCR，第一链的合成用的Primer是oligo(dT)18 prime 反应体系： RNA模板：0.1ng-5ug Oligo(dT)18 1ul Water,nuclease-free 至12ul 65摄氏度5分钟，这步是为了消除发卡结构 然后加5X Reaction Buffer 4ul Ribolock RNase inhibitor(20u/ul) 1ul 10mM dNTP Mix 2ul ReverAid M-MuLV Reverse Transcriptase (200u/ul) 1ul 总共20ul 42度孵育1小时就行 |
2楼2013-05-20 21:24:25