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周小芬

铜虫 (初入文坛)

[交流] SDS-PAGE蛋白电泳已有12人参与

我是生物菜鸟,本科是学化学的,想问问跑SDS-PAGE蛋白电泳时浓缩胶电压60V分离胶电压是120V 行吗?我整个过程没用到2个小时,是不是太快了,太快了有没有什么影响。
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雨梦无声

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
关键在你的胶配方……

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3楼2013-05-15 23:56:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
变性蛋白电泳快一点问题不是很大。虽然快一点会发热多一点,但对SDS-PAGE影响不大,只要不是特别热。你设的那些电压应该是mini胶的,而且也不是很快。至于两个小时什么的,要看你的胶有多大,一般除了考虑胶的大小,电压以外,你要看一下实际电流。真正发热是看功率的。一般的电流不超过20mA/gel就可以的。
4楼2013-05-16 07:02:45
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飞天36

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
分子克隆写的,电泳一般是15V/cm
我们实验室一般分离胶和浓缩胶,所用电压差不多
如果你想跑的条带好看一点,电压稍微小一点,分离效果比较好
但也不能太小,防止蛋白扩散速度比电泳速度还快
生活很多不如意,现在想给变
6楼2013-05-16 13:41:58
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普通回帖

不转录的DNA

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主,你的做法是对的,你不用怀疑!我们平常做的也就是先60V浓缩,后120V分离!至于时间的长短,你感觉有影响吗?只要你的胶配的浓度是对的!

像过去用的那种很长的玻璃槽,需要需要琼脂封闭的那种!和现在你买的那种斜插式小槽能比吗?肯定是前者的电泳时间长点啊!时间长短并不能说明问题!!!

我现在用的那种梯度胶,半个小时到40min就能跑完!你说能比吗????

希望能帮你解惑!!!

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长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
2楼2013-05-15 21:02:48
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
2块的话都还在承受范围!我2块放冰上分离胶稳流50ma都跑过,条带很清晰(除了14kd以下)一块肯定高了,从你跑胶时间看还算正常,如果接近1h,那胶多半跑差了!

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Dripping Concentrated!!energetic and active!
5楼2013-05-16 07:51:57
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sanmiao

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们通常的做法是,浓缩胶80v,分离胶160-180.一个小时就结束战斗,如果怕发热,放一个冰袋在电泳槽里,一点问题都没有!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2013-05-16 13:48:29
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如艺小果果

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同楼上,分离胶快一点是没有影响的,省时间
8楼2013-05-17 11:02:23
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sd3824289

木虫 (正式写手)

60-120不大,时间最好不要太久!这样对样品不好!
坚持,就像流星,即使知道最后的结果,也要勇敢的走到最后!
9楼2013-05-17 15:22:09
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nemo88

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

10楼2013-05-18 00:21:46
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