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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 电泳中个条件与蛋白聚体的关系
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Allen206

银虫 (小有名气)

[交流] 电泳中个条件与蛋白聚体的关系 已有4人参与

我有个问题搞不懂啊，电泳中各个条件与蛋白是否解聚的关系，有以下几点：
1.样品煮沸能使蛋白解聚么？就是由亚基组成的蛋白解开成为单体
2.SDS能使由亚基组成的蛋白解聚么？
3.SDS-PAGE中，很多人用含有2ME,SDS和    没有2ME,有SDS的样品处理液，根据结果断定蛋白的亚基组成，这样对么？
4.如果SDS能使蛋白解聚，那么是不是只有用Native-PAGE才能鉴定蛋白的真实分子量啊？
小妹是新人，希望同仁们指点啊，先谢过了。
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不想说什么，，，，
1楼 2012-12-25 16:16:57
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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1. 煮沸样品可以是蛋白质变性。如果buffer中没有象SDS之类的去垢剂不能使亚基之间的作用完全解开。
2. SDS可以破坏亚基之间的疏水作用和氢键，从而使多亚基复合体解聚。
3. 加入巯基乙醇的目的是把二硫键还原成-SH。有些蛋白质会靠二硫键形成二聚体，或者有亚基之间二硫键，光靠SDS不能使其完全解开。
4. SDS-PAGE来判断蛋白质的分子量实际上的单体亚基的分子量。如果你需要确定多亚基组成的蛋白复合体的分子量，加入SDS会破坏亚基之间的作用，只有在native条件下做。
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2楼2012-12-25 17:09:39
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mguo15

银虫 (小有名气)
★
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看来你喜欢电泳，可以用尿素梯度与胶梯度的混合胶，得到非常好的蛋白解聚曲线。不过制胶有点难度，可以了解它，不推荐你做。
SDS 对膜蛋白有保护作用，所以你的问题最好一对一而定。cicelyzh 的解答还是比较标准的。
Native gel not the best. 其他的色谱之类更好。不过PAGE肯定是最便宜的。
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3楼2012-12-26 00:02:42
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alicelchf

木虫 (著名写手)
★
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如果你蛋白本身就是单体而且可以单体稳定存在，那变性胶是没有问题的
native可以判断天然存在形态。是对结构的判断，就是说你变性胶的分子量可能是native的一部分
通常蛋白在高温态很不稳定
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修身、齐家、治国、平天下
4楼2012-12-26 11:18:45
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Allen206

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-25 17:09:39
1. 煮沸样品可以是蛋白质变性。如果buffer中没有象SDS之类的去垢剂不能使亚基之间的作用完全解开。
2. SDS可以破坏亚基之间的疏水作用和氢键，从而使多亚基复合体解聚。
3. 加入巯基乙醇的目的是把二硫键还原成-S ...

非常感谢您的解答，如果我要判断一个蛋白是否聚体，是不是可以用Native-PAGE,然后样品处理液一个用没有SDS和2ME的， 另外一个样品条件用有SDS和2ME再加煮沸，您看这样可以吗？
    还有一个问题就是Native-PAGE是不是靠的蛋白自身在缓冲体系中所带的电荷，再加上本身空间结构的因素在胶中涌动？那Maker是不是就失去了参考价值，因为涌动条件不是单一的靠分子量了啊，还受到空间结构的影响，我说的对么？希望不吝赐教啊
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不想说什么，，，，
5楼2012-12-26 12:26:26
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Allen206

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mguo15 at 2012-12-26 00:02:42
看来你喜欢电泳，可以用尿素梯度与胶梯度的混合胶，得到非常好的蛋白解聚曲线。不过制胶有点难度，可以了解它，不推荐你做。
SDS 对膜蛋白有保护作用，所以你的问题最好一对一而定。cicelyzh 的解答还是比较标准的 ...

非常感谢您的解答，如果我要判断一个蛋白是否聚体，是不是可以用Native-PAGE,然后样品处理液一个用没有SDS和2ME的， 另外一个样品条件用有SDS和2ME再加煮沸，您看这样可以吗？
    还有一个问题就是Native-PAGE是不是靠的蛋白自身在缓冲体系中所带的电荷，再加上本身空间结构的因素在胶中涌动？那Maker是不是就失去了参考价值，因为涌动条件不是单一的靠分子量了啊，还受到空间结构的影响，我说的对么？希望不吝赐教啊
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不想说什么，，，，
6楼2012-12-26 12:27:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by Allen206 at 2012-12-26 12:26:26
非常感谢您的解答，如果我要判断一个蛋白是否聚体，是不是可以用Native-PAGE,然后样品处理液一个用没有SDS和2ME的， 另外一个样品条件用有SDS和2ME再加煮沸，您看这样可以吗？
    还有一个问题就是Native-PAGE是 ...

有很多做native-PAGE的方法。如果只是普通的电泳缓冲体系不加SDS，蛋白质是靠本身所带电荷移动，而且对pI小的蛋白不能向下移动，所以局限性很强。目前比较好用的是blue-native和改进的clear-native。主要是在负极缓冲液和样品中加入带负电荷的物质，使蛋白质可以较顺利地从负极跑向正极。做native-page也有marker的，分子量可以大致参考的。
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7楼2012-12-26 12:58:45
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奔跑吧蛋白

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-25 17:09:39
1. 煮沸样品可以是蛋白质变性。如果buffer中没有象SDS之类的去垢剂不能使亚基之间的作用完全解开。
2. SDS可以破坏亚基之间的疏水作用和氢键，从而使多亚基复合体解聚。
3. 加入巯基乙醇的目的是把二硫键还原成-S ...

我想求教一下，跑非变性电泳时，血清中的抗原抗体复合物会分开吗，还是仍然以复合物的形式存在

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8楼2016-10-10 22:06:32
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