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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求高手解惑：重组质粒酶切检验不出来
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lihaiyan0208

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求高手解惑：重组质粒酶切检验不出来

我做重组质粒的酶切验证，pcr检测时结果正确，有目的片段。但是用双酶切检验时，只有目的条带位置一条带，按理论应该在目的条带上面还有一个条带的。单酶切验证也是比理论少一条条带。
我的目的片段大概2600bp，载体用的是pc1301，酶切时间是6小时，酶切体系为
质粒       5ul                 质粒    5ul             质粒   5ul
sma I      1ul                 Apa I   1ul             Sph I   1ul
spe I       1ul                 Sac I    1ul                  
T Buffer  2ul                 L  Buffer 2ul           H Buffer 2ul
BSA        2ul
加水至   20ul               
图片中M为15000,2和5为未酶切的质粒，3和7是Sma I/Spe I 双酶切的结果，4和8为Apa/Sac I酶切，5和9为Sph I单酶切结果。求高手指点，怎么回事？

4X(EX2OQE(Q9M{Y1$92FLLY副本.jpg
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1楼 2013-05-10 19:46:04
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bolysu

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2013-05-10 21:42:33
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lihaiyan0208

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bolysu at 2013-05-10 21:42:33
质粒太少了，目的基因量少是看不出来的

质粒浓度比较高加5ul的话就有将近1ng了，所以这个应该不是质粒浓度的关系，而且我的目的条带应该是在的，就是Marker从下往上数第三条带那个地方的那个条带。
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3楼2013-05-10 22:42:35
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