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北极星※

金虫 (小有名气)

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[求助] PCR电泳图求解已有1人参与

PCR后上样2.5ul，前8个孔为mix 引物模板水中间八个为easy taq buffer dNTP 水引物前16个为相同引物，产物大小为392bp,后8个为easy taq 引物不同不知道是什么原因导致P不出东西,求大家指点

2013-5-6 10PRMER.JPG

[ Last edited by gyesang on 2013-5-6 at 14:38 ]

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1楼 2013-05-06 14:14:14

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chiden

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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北极星※: 金币+1, ★★★很有帮助, 从实际出发很感谢 2013-05-06 21:46:10

初看楼主的这个帖子内容介绍，额，有点没懂起楼主的描述意思是啥子
直接看图，貌似楼主的MARKER应该是2K plus，但是似乎没跑开，看起来很多条带的样子。
这就有点奇怪了哈，不晓得楼主是用的多少浓度的胶跑的。
在我们实验室跑胶跑了这样的距离看不出来条带有时候是正常现象
原因：
1.在跑胶的过程中样品会存在一定程度的弥散，而且楼主点样的样品量也比较小，这样的距离成像无带个人觉得实属正常。
2.根据楼主MARKER条带的位置来看，这个电泳的时间应该比较长，时间长样品也是会弥散的。
3.PCR未扩增成功，本来嘛，PCR这个东西有时候就是个运气的问题。

解决办法：
1.重新PCR扩增，多做几次总会有一次成功的。
2.进行梯度PCR，寻找最佳退火温度。个人觉得一出事情就觉得自己引物设计有问题是不明智的，毕竟重新设计引物到合成拿到手上至少4天以后，时间上就耽搁了，且不一定就真的是引物问题。
3.电泳检测时建议使用2.5%胶浓度。不晓得你们的电泳仪器是个啥子样子的，反正MARKER刚好跑开的时候成像是最好的，这个你可以自己解决的，避免时间过长。