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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关菌落PCR,求解析~
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gissingtan

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关菌落PCR,求解析~

前一段做的转化长出的转化子，在抗性板上划线，用枪头沾取（划线上长满了菌，没有单菌落）在PCR体系中混一下，进行PCR反映。总共10个样品，只有第十个出现了目的条带。其他样品在点样孔以及点样口附近有明亮的带，师兄师姐帮帮忙，这是怎么回事？

PCR.jpg
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1楼 2013-04-25 17:06:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

panyuzhu

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-25 20:13:56
gissingtan: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-26 10:55:37
本帖内容被屏蔽
2楼2013-04-25 20:06:45
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植物科研男

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-04-25 21:27:47
gissingtan: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-04-26 10:55:49
可能是你的菌体量太大了。这样你的模板太多是扩增不出来任何条带的，加样孔里面的是你菌体裂解的基因组DNA。建议你再稍加一点菌体就应该没事了。
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坚持就是胜利
3楼2013-04-25 21:14:17
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gissingtan: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-26 10:55:57
that's genomic DNA from the bacterial.
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4楼2013-04-26 01:31:07
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1856029357

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-28 11:06:03
你的阴性对照和阳性对照设置没？你确定跑出来的就是你要的目的基因片段？个人认为你的菌体量可能太大，扩出来的都是大片段了。
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乱世出英雄，盛世皆狗熊
5楼2013-04-26 09:05:32
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普通回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
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6楼2013-04-26 14:58:15
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-26 19:12:19
应该是菌太多了，挑了菌可以放到100ul-500ul的无菌水中，混匀后把这个当成模板加到PCR体系中
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你的日子如何，你的力量也必如何！
7楼2013-04-26 15:39:17
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lu78wi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接重新转吧，单菌落才有意义
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8楼2013-04-26 16:08:04
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yy001519

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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gissingtan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-04-28 13:50:20
模版量太大，建议你将平板上的菌落跳出，重新活菌，然后再做菌落PCR，即取1ul菌液，其他按标准体系加好，注不能加酶，然后98度煮10min，迅速取出冰上降温，然后加酶，进行PCR扩增！
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9楼2013-04-27 11:39:15
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andywang6137

木虫 (著名写手)
★
gyesang: 金币+1, 我的是加酶后95度，510分钟，再进行后面的循环！ 2013-04-28 13:51:03
引用回帖:
9楼: Originally posted by yy001519 at 2013-04-27 11:39:15
模版量太大，建议你将平板上的菌落跳出，重新活菌，然后再做菌落PCR，即取1ul菌液，其他按标准体系加好，注不能加酶，然后98度煮10min，迅速取出冰上降温，然后加酶，进行PCR扩增！

菌液PCR吗?我们一般都是加酶后95度，10分钟，再进行后面的循环。
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10楼2013-04-28 09:26:50
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