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gissingtan

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关菌落PCR,求解析~

前一段做的转化长出的转化子,在抗性板上划线,用枪头沾取(划线上长满了菌,没有单菌落)在PCR体系中混一下,进行PCR反映。总共10个样品,只有第十个出现了目的条带。其他样品在点样孔以及点样口附近有明亮的带,师兄师姐帮帮忙,这是怎么回事?

PCR.jpg
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yy001519

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gissingtan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验! 2013-04-28 13:50:20
模版量太大,建议你将平板上的菌落跳出,重新活菌,然后再做菌落PCR,即取1ul菌液,其他按标准体系加好,注不能加酶,然后98度煮10min,迅速取出冰上降温,然后加酶,进行PCR扩增!
9楼2013-04-27 11:39:15
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-25 20:13:56
gissingtan: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-26 10:55:37
本帖内容被屏蔽

2楼2013-04-25 20:06:45
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植物科研男

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励应助! 2013-04-25 21:27:47
gissingtan: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-04-26 10:55:49
可能是你的菌体量太大了。这样你的模板太多是扩增不出来任何条带的,加样孔里面的是你菌体裂解的基因组DNA。建议你再稍加一点菌体就应该没事了。
坚持就是胜利
3楼2013-04-25 21:14:17
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gissingtan: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-26 10:55:57
that's genomic DNA from the bacterial.
4楼2013-04-26 01:31:07
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