| 查看: 899 | 回复: 4 | |||
[求助]
求助PCR产物酶切问题
|
|
我的产物是243bp和144bp的小片段,PCR出来条带很亮,我是用总100ul的体积,然后全部胶回收,最后回收到60~70ul.再去电泳检测亮度还是不错的. 现在要进行双酶切,我P的时候两头加了酶切位点,还有3个保护碱基,用的是ECoR I Xba I. 都是takara的酶. 由于我没办法测浓度,因为空白对照的ELLUTE BUFFER 不够了. 这样一般要加多少ul. 说明书写得是20ul的体积,切1个小时.如果我后期要载体连接,载体是5700+bp的这样我应该要有多少的含量才够呢? 我们实验室有个紫外投射仪上面有个功能是根据marker亮度还有你自己产物的亮度跑出来以后可以估算你产物浓度的.这个准不准呢? |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有200人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有14人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR产物双酶切遇到问题，求救！！！
已经有7人回复
- pcr产物酶切后电泳跑成这样 费解啊！！！
已经有29人回复
- 请教一个PCR产物直接酶切的问题
已经有28人回复
- 载体总是连不上，已经一个月了~真心求助，详细在帖子里
已经有7人回复
- PCR产物经酶切电泳后所得的基因型与测序结果不一致，是何原因？该如何处理？
已经有10人回复
- PCR产物凝胶回收、酶切等问题请教
已经有7人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 求助 双酶切验证阳性克隆的问题
已经有12人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- PCR产物酶切检测不到东西是为什么
已经有11人回复
- 【求助/交流】T-RFLP酶切产物存放时间问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】求助~promega试剂盒回收效率低
已经有13人回复
- 【求助/交流】PCR产物酶切条带淡的原因
已经有5人回复
- 【求助/交流】同尾酶构建载体问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】粘性末端连接问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR产物酶切后，电泳时遇到的的问题，真心求教！
已经有9人回复
- 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
已经有18人回复
- 【求助/交流】关于PCR的问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】pcr,酶切，连接，哪步可以省？
已经有13人回复
- 【求助/交流】质粒pPICZA酶切问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】Xhol 酶切不能切开
已经有13人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
xjtu0025(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-25 16:56:53
感谢参与，应助指数 +1
xjtu0025(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-25 16:56:53
| 你是用nanodrop定量的吗？不用elute buffer直接用水做空白也可以的。此外，你可以根据电泳检测时的亮度对比marker的相应条带估算浓度。小片段与载体连接一般用6-10:1的摩尔比。一般连接时载体用50ng，你根据碱基数目计算所需要目的片段的质量。总的来说，连接所用的DNA是很少的，一般都是在几十ng级别的。一般小片段回收的损失比较多，一般酶切用1-2μg是足够的。 |
2楼2013-04-25 14:32:06
3楼2013-04-25 18:11:07
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-04-25 21:28:56
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-04-25 21:28:56
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2013-04-25 19:48:43
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
5楼2013-04-26 08:53:13
