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liyong1981

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】求助~promega试剂盒回收效率低

如题，用的是胶和PCR通用的那种kit ,前几次回收很高，后来就不行了，只有30%左右，后来又买了个新的试剂盒，还是不行，崩溃啊~浪费我的载体啊，我是酶切载体和PCR产物，65°10分钟，失活酶，然后PCR直接回收，载体跑胶回收，都很低，以前很高的呀~万能的小木虫，有高人解答下没？谢谢

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1楼 2010-11-16 11:12:18

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liyong1981

金虫 (正式写手)

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自己顶一个~

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2楼2010-11-16 11:26:06

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gao-feng

铁杆木虫 (著名写手)

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liyong1981(金币+1): 2010-11-16 13:26:23

换一个公司的试剂盒试试，以前我们实验室用天根的试剂盒有段时间会收不出来，后来就换成百泰克公司的，很好用的。

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3楼2010-11-16 12:10:31

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liyong1981

金虫 (正式写手)

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★
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-11-16 22:53:02

载体，5000，PCR 750的，片段大小肯定没有问题的~要是这种小问题，我也不求救了~

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4楼2010-11-16 13:27:09

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liyong1981

金虫 (正式写手)

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顶一个~

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5楼2010-11-16 15:02:09

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liyong1981

金虫 (正式写手)

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有人用过Promega 的这个盒子么，说说撒~

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6楼2010-11-16 17:36:47

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li_wyman

金虫 (小有名气)

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liyong1981(金币+1): 2010-11-22 11:33:13

是染料的问题吗，有的染料影响回收，电泳时放多了就会受不了

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7楼2010-11-21 20:18:57

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shuxian1

银虫 (小有名气)

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liyong1981(金币+1): 2010-11-22 11:33:10

我们就用Promega 的回收试剂盒，回收之后泡胶检查亮度是有所减少，但是影响不大啊，

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8楼2010-11-21 20:56:39

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liyong1981

金虫 (正式写手)

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=关键是，我PCR产物酶切后直接回收也很少，做胶回收酶切载体，更少，以前还好好的呢，买个新盒子也是不行，奇了怪了~胶也从西班牙换成了西格玛，还是不行~

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9楼2010-11-22 11:34:37

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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

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PCR产物量足吗？或者说你做酶切的DNA量足量吗？

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10楼2010-11-22 12:28:58

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amilie030312

金虫 (正式写手)

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★
lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-22 12:46:04
liyong1981(金币+1): 2010-11-22 15:25:36

最好能不回收直接做，只要是回收的效率都很低的，胶回收的能达到50%的已经算比较高的了，柱子的好些的试剂盒能达到70%吧，但也有很大损失的。所以最好整套下来都不回收是最好的了。

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11楼2010-11-22 12:38:19

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liyong1981

金虫 (正式写手)

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载体酶切不回收，请问你怎么操作？还要再连接外源片段~

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12楼2010-11-22 15:26:11

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谁伴我闯荡

至尊木虫 (著名写手)

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在线: 164小时
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liyong1981(金币+1): 2010-11-23 11:18:53

Promaga的回收盒子还是很好的啊，我现在一直也在用，楼主加大反应体系试试，以量取胜

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13楼2010-11-22 17:00:11

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希希隆

新虫 (初入文坛)

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帖子: 1
在线: 8分钟
虫号: 1461166

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+4): 回帖的主题日期很久了，你可以重新发主题求助，这样关注率较高！鼓励新虫发帖！ 2011-10-26 11:07:29

哎，我也是同样地情况啊

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14楼2011-10-26 09:57:58

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