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akyuan

金虫 (正式写手)

[求助] PCR产物电泳条带比预期的大,怎么回事?

两个PCR产物,电泳后条带都是比预期的大100bp左右,预期大小分别为171bp和168bp。应该在100bp和250bp之间,现在电泳条带两个都在250bp之上,怎么回事呢?跑了两次PCR和电泳,情况完全一样。

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akyuan

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wxl007777 at 2013-04-20 16:50:01
模板是什么?如果是cDNA可能是有DNA污染,多了100bp可能就是个内含子

是cDNA。还有个问题,同样的模板,程序,引物不同,PCR后电泳条带与预期的大小一样,怎么解释呢?谢谢你。
3楼2013-04-20 17:43:06
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wxl007777

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-22 15:38:44
模板是什么?如果是cDNA可能是有DNA污染,多了100bp可能就是个内含子
2楼2013-04-20 16:50:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助! 2013-04-22 17:10:44
引用回帖:
3楼: Originally posted by akyuan at 2013-04-20 17:43:06
是cDNA。还有个问题,同样的模板,程序,引物不同,PCR后电泳条带与预期的大小一样,怎么解释呢?谢谢你。...

另外的引物也是跨内含子吗?如果没有跨内含子,cDNA模板P出来的应该与基因组DNA为模板P出来的一样大。此外,消化DNA往往只是把基因组DNA消化成碎片,如果降解不完全,有时候会发生你说的情况。看是不是模板污染了基因组DNA,只需要用基因组DNA为模板P一下看看是不是与你用cDNA模板P出来的片段一样大就可以了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2013-04-21 01:46:27
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akyuan

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-21 01:46:27
另外的引物也是跨内含子吗?如果没有跨内含子,cDNA模板P出来的应该与基因组DNA为模板P出来的一样大。此外,消化DNA往往只是把基因组DNA消化成碎片,如果降解不完全,有时候会发生你说的情况。看是不是模板污染了基 ...

好的,谢谢你。
5楼2013-04-22 15:16:40
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