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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于蛋白质的跑胶
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永远不知道

至尊木虫 (著名写手)

金花家族创始人

[求助] 关于蛋白质的跑胶

1.什么是变性胶，什么是非变性胶，我跑的是SDS-PAGE，跑完后蛋白是否具有活性
2.什么是连续胶，什么是不连续胶
3.做目的蛋白的抗体前需要先知道蛋白的那些性质？
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1楼2013-04-16 17:59:03
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-17 10:16:35
SDS是强离子去垢剂，破坏蛋白质的高级结构，并与担保结合使其带负电荷。SDS-PAGE的样品已经完全失去生物活性，不管蛋白质的天然等电点如何，都是从负极向正极跑的。做目的抗体的抗原来源可以做全蛋白表达、部分蛋白表达或者是合成肽段。如果做全蛋白表达的话，直接把目的蛋白的序列克隆到大肠杆菌里过表达后纯化。如果做部分蛋白表达或者合成肽段，需要分析蛋白的表面抗原性。
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5楼2013-04-17 07:32:19
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普通回帖

梁以薰

木虫 (著名写手)
看不懂的说……

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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如人饮水，冷暖自知
2楼2013-04-16 18:51:55
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_小小鸟

金虫 (正式写手)

御林军

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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永远不知道: 金币+2, 还行 2013-04-16 20:49:51
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-17 10:16:16
1、SDS-page是变性胶，蛋白跑之前就变性了。不加SDS是非变性胶，可保留蛋白活性。
2、非连续电泳包括浓缩胶和分离胶，离子浓度和pH不一样，连续胶只有分离胶
3、抗体这一部分不是很熟悉
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一米阳光照大地。。。
3楼2013-04-16 19:25:03
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小科研女dow

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
永远不知道: 金币+2, 你竟然煮了10分钟啊 2013-04-16 20:50:24
你跑SDS-PAGE之前会有一个步骤
就是在100℃下煮沸10分钟
主要就是让蛋白失活
所以SDS后蛋白没有活性了
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做出色的科研人
4楼2013-04-16 20:15:13
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祯嗳溢誓

荣誉版主 (文坛精英)

本只已有主

优秀版主优秀版主
姐姐是生物类的哦，
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珍惜时间珍爱自己珍重亲情珍视友情潜心学习努力提升锁定目标拼搏前程
6楼2013-04-17 10:24:39
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带刺毛毛虫

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做抗体前，要知道你的抗原的分布
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加油
7楼2013-04-17 10:33:28
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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永远不知道: 金币+5, ★有帮助, 谢谢 2013-04-17 16:31:56
3.做目的蛋白的抗体前需要先知道蛋白的那些性质？
那要看你的具体目的，如果直接就是需要做个该蛋白质的单克隆抗体，就直接知道分子量和序列就行，关键是免疫实验动物后的免疫原性。如果你要想确定该蛋白质的具体抗原免疫簇，那就要利用NMR，X-ray diffraction测定抗原-抗体的结合位点的结构，或者用基因敲处目的蛋白质的相关氨基酸来影响其免疫原性，或者对目的蛋白质的有关的氨基酸进行化学修饰来影响其免疫原性，还可以直接用电子显微镜或者原子力显微镜直接观测抗原-抗体的相互作用来确定抗原的抗原免疫簇。要在研究该蛋白质的其他与免疫有关的特征，好需要其他具体信息。。。
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8楼2013-04-17 11:57:40
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永远不知道

至尊木虫 (著名写手)

金花家族创始人
引用回帖:
6楼: Originally posted by 祯嗳溢誓 at 2013-04-17 10:24:39
姐姐是生物类的哦，

马上把家族给我换过来
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9楼2013-04-17 16:37:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 永远不知道 at 2013-04-17 16:37:53
马上把家族给我换过来...

生物学与心理学关联还是挺紧密的，尤其是神经生物学与生理心理学及认知心理学关系非常紧密。
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10楼2013-04-17 21:15:52
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