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大引物PCR所出现的问题，求助 已有1人参与
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本人最近在做易错PCR，参考文献使用MEGAWHOP Cloning的方法，使用易错PCR产物（大约1200bp左右）作为引物，全质粒作为模版进行PCR。体系中使用了Takara的PrimeSTAR HS DNA Polymerase，总体积100微升，20微升5*PS Buffer,8微升dNTPs，4微升易错PCR回收片段，1微升全质粒模版，1微升酶，分装之后进行PCR。PCR条件为72℃-5min，98℃-3min，98℃-10s，60-65℃-10s，72℃-6min（30个循环），72℃-10min，4℃-保存。 现在出现以下问题：1.PCR后0.9%琼脂糖凝胶电泳检测，胶孔非常亮，但是应该不会有蛋白质和基因组污染的问题。2.PCR产生的条带偏大很多，图中所用的是DL10000的Marker，有一条明显的10000+条带。3.PCR产物经过DpnI消化后转化涂平板，没办法长，尝试过对PCR产物进行浓缩，但是效果不佳。 希望大家帮我分析一下问题出在哪儿，先谢谢大家了。  xz20130401.jpg |
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tete1987
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