应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接后酶切检测遇到的问题
51/1返回列表
查看: 1519  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

auliuym

木虫 (著名写手)

[求助] 连接后酶切检测遇到的问题

请教各位分子生物学大德诸君：
  我将目的基因插到PET15b中，然后转入DH5a菌株中，再提取质粒、酶切跑胶检测，结果如下图所示：

左边是Marker，下面的胶是未酶切前，上面的是酶切后，泳道从左至右一一对应。可以看出，第3、5、8泳道，经过酶切后出现两条带，上一条应当是质粒，下一条是目的DNA片段，为什么这三个中的质粒条带与第2、4、6、7、9、10中的质粒条带位置不一样？是超螺旋结果的质粒吗？同理，可以看见在下面一块胶中第5、8的质粒条带与其他泳道的不同？为什么？
望大德诸君不啬赐教，不胜感激！！！有经验者，回答此问题，并很有说服力，将有金币奉上。

20130326.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验交流

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
日月逝矣，岁不我与。
1楼 2013-03-26 17:12:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
auliuym: 金币+40, ★★★★★最佳答案 2013-03-27 19:46:08
引用回帖:
4楼: Originally posted by 王平阳 at 2013-03-27 10:14:15
从你的图上看，第2、5、8三个和其他的不一样，从酶切图看也是这样，但是切下来的片段大小是一样的，所以可能是载体不一样，也就是2、5、8和其他的是不同的载体，连的目的基因是一样的。
载体不一样可能有两个原因： ...

还有，你最后一个泳道插入的不是目的基因（你的目的基因2000多呢），而是介于250到500bp之间的一个小片段，不可用哦！
赞一下 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
5楼2013-03-27 10:18:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

小科研女dow

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
auliuym: 金币+10, ★有帮助 2013-03-26 21:34:11
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-27 13:41:43
自我觉得 2467910的结果是正确的
切后是跑的慢了 理论上将应是单条带
可见你的没有切完全
下面的结果可能是提权过程的问题
出现了资解旋等问题
赞一下 回复此楼
做出色的科研人
2楼2013-03-26 17:24:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

auliuym

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小科研女dow at 2013-03-26 17:24:59
自我觉得 2467910的结果是正确的
切后是跑的慢了 理论上将应是单条带
可见你的没有切完全
下面的结果可能是提权过程的问题
出现了资解旋等问题

3、5、8如果没有切完全的话，最上面也应该有一条条带，即线状的质粒，也就是说应该有三条啊。
再，可以从下图看出来，3、5、8质粒本身也显示出比较小，跑得快？为什么？
若解螺旋了，应当跑得慢才是啊。
赞一下 回复此楼
日月逝矣，岁不我与。
3楼2013-03-26 17:46:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-03-27 13:41:54
从你的图上看，第2、5、8三个和其他的不一样，从酶切图看也是这样，但是切下来的片段大小是一样的，所以可能是载体不一样，也就是2、5、8和其他的是不同的载体，连的目的基因是一样的。
载体不一样可能有两个原因：一是载体本身发生了变异，如片段缺失，这个可能性不大，另一个就是载体污染，混入了其他载体。
我的建议是用载体上其他的酶切位点对应的两种酶切了试试，如果有的能切开而有的切不开，就说明是载体出了问题。
另外，你要是赶进度，可以这样处理：你用的载体大小应该知道的，用那个正确的往下做就OK啦，反正双酶切验证是正确的。
赞一下 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
4楼2013-03-27 10:14:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +3 kongweilin 2026-03-26 3/150 2026-03-26 00:53 by 15723253818
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +7 holy J 2026-03-21 7/350 2026-03-24 17:24 by xiaohai104
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 352求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123！
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭