| 查看: 1516 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
auliuym木虫 (著名写手)
|
[求助]
连接后酶切检测遇到的问题
|
||
|
请教各位分子生物学大德诸君： 我将目的基因插到PET15b中，然后转入DH5a菌株中，再提取质粒、酶切跑胶检测，结果如下图所示： 左边是Marker，下面的胶是未酶切前，上面的是酶切后，泳道从左至右一一对应。可以看出，第3、5、8泳道，经过酶切后出现两条带，上一条应当是质粒，下一条是目的DNA片段，为什么这三个中的质粒条带与第2、4、6、7、9、10中的质粒条带位置不一样？是超螺旋结果的质粒吗？同理，可以看见在下面一块胶中第5、8的质粒条带与其他泳道的不同？为什么？ 望大德诸君不啬赐教，不胜感激！！！有经验者，回答此问题，并很有说服力，将有金币奉上。  20130326.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 实验交流 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有150人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR产物纯化后酶切，连接
已经有28人回复
- 连接检测时双酶切总是切不开
已经有9人回复
- 双酶切之后，线状质粒的连接问题
已经有13人回复
- 酶切酶连转化后单克隆检测不对
已经有8人回复
- 载体和酶切片段连接的问题
已经有5人回复
- 连接产物双酶切
已经有11人回复
- 关于酶切后的连接问题，共同探讨共同进步
已经有18人回复
- 双酶切，连接，转化问题
已经有30人回复
- 酶切后未纯化连接出现的问题
已经有18人回复
- 本人做了双酶切连接转化，真的真的有想死的心了
已经有6人回复
- 基因克隆中酶切连接问题
已经有13人回复
- 酶切酶连转化
已经有11人回复
- 单酶切连接的问题
已经有4人回复
- 连接酶切问题
已经有10人回复
- 单酶切，酶连之后验证问题
已经有6人回复
- PCR产物酶切检测不到东西是为什么
已经有11人回复
- PCR是阳性但酶切是阴性，怎么回事？
已经有10人回复
- 酶连之后如何检测？
已经有7人回复
- 【求助/交流】质粒双酶切连接问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于酶切连接转化的问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】酶切连接后的分子大小问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
5楼2013-03-27 10:18:18
小科研女dow
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 3823.2
- 散金: 20
- 红花: 2
- 帖子: 187
- 在线: 163.4小时
- 虫号: 2112648
- 注册: 2012-11-07
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
2楼2013-03-26 17:24:59
auliuym
木虫 (著名写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 7287.5
- 散金: 542
- 红花: 42
- 帖子: 2778
- 在线: 212.8小时
- 虫号: 1513072
- 注册: 2011-11-28
- 性别: GG
- 专业: 数论
3楼2013-03-26 17:46:16
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-03-27 13:41:54
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-03-27 13:41:54
|
从你的图上看，第2、5、8三个和其他的不一样，从酶切图看也是这样，但是切下来的片段大小是一样的，所以可能是载体不一样，也就是2、5、8和其他的是不同的载体，连的目的基因是一样的。 载体不一样可能有两个原因：一是载体本身发生了变异，如片段缺失，这个可能性不大，另一个就是载体污染，混入了其他载体。 我的建议是用载体上其他的酶切位点对应的两种酶切了试试，如果有的能切开而有的切不开，就说明是载体出了问题。 另外，你要是赶进度，可以这样处理：你用的载体大小应该知道的，用那个正确的往下做就OK啦，反正双酶切验证是正确的。 |
4楼2013-03-27 10:14:15
